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标题:【求助】非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳怎么做?

sunbent[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳怎么做?


请问non-denaturing gradient gel electrophoresis(非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳)是怎么做的?
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非变性 PAGE：不加SDS
1、 蛋白迁移的不仅取决于蛋白的大小，还包括其电荷或者形状。
2、对于pH值很敏感。（影响蛋白所带的净电荷）
3、可分离开折叠蛋白和非折叠蛋白，单体和二聚体，蛋白复合物
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sunbent[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳比变形聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳复杂吗?能做变形聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳的实验室都能做非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳吗?
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非变性和变性只是配胶的时候加和不假SDS而已。
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sunbent[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是我看的文献中它说用non-denaturing gradient gel electrophoresis方法,可又写SDS-PAGE分离蛋白,是怎么一回事呀?我有点摸不着大脑.....
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

说起来，非变形电泳比变形电泳还简单，除了楼上说得不需加SDS外，上扬缓冲液也有不同，再就是非变形电泳用品不需要煮沸处理。你所说的问题，可能文章时说通过SDS-PAGE把蛋白的亚基分开吧！
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sunbent[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下:上样缓冲液有什么区别呀?
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样缓冲液中不加DTT变性剂，不煮沸，让蛋白呈天然状态
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sunbent[使用道具]
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发表于 2014-4-15 08:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问浓度梯度凝胶电泳也有分离胶和浓缩胶之分吗?那梯度是指哪个胶的呀?
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