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标题:【求助】显影显的不好丢了膜太可惜，有什么办法可以...

vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】显影显的不好丢了膜太可惜，有什么办法可以...


昨天晚上做的最后显影显得很奇怪，在膜的四条边缘都曝光了，条带却一个都没出来，不知道是怎么回事，我是新手，还请大家指教，还有，我想重新用这张膜再显一次影，可以吗？膜怎么处理呢？谢谢大家了！！
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是HRP标记的抗体＋底物可以。
如果是碱性磷酸酶的不行。
处理就是把膜用TBST/PBST洗3次，每次5分钟，然后从新加底物曝光
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的是HRP标记的二抗，也就是说，我用TBST洗完之后从加二抗那步往下做就可以了？
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还是重新再加一抗？
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

直接跟发光液反应就行了，因为HRP是催化底物进行反应的，而酶本身理论上讲是没有消耗的。所以用TBST洗掉底物后再加底物进行反应即可。
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的膜是NC膜还是PVDF膜? 后者可多次显影．但是不知下次显影会有什么结果？是否与这次相同？
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yysr238[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有些公司会卖膜再生液的，像业力，不过好像一般是PVDF膜
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baidukk[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
直接加发光液反应，效果不好，灵敏度往往会比第一次直接显色的效果要差，可能会影响实验结果，不建议这样作。建议加入膜再生液，重新加一抗和二抗后显色。膜再生液的价格要远远低于你重新作一次实验所消耗的成本。我们现在实验都用这个，效果不错。现在有些公司的膜再生液作的不错，只需要常温下反应5－10分钟，即可以达到再生效果，便于操作。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

"建议加入膜再生液，重新加一抗和二抗后显色"?
还要加一抗和二抗？是指另一个蛋白吗？不用stip吗？
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prettygirl@[使用道具]
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发表于 2014-4-15 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

膜再生液是解析液么？
处理完可不可以用来结合其他的抗体，摆脱之前抗体的干扰？
可以自己配么，可以的话劳烦给推荐个配方吧Smile
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