【求助】小分子蛋白转印怎么提高转印效率？

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标题:【求助】小分子蛋白转印怎么提高转印效率？

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发表于 2014-4-15 20:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近做小分子蛋白的检测（16kd), 但发现每次转印的效率都不高，转完后胶上考染还有许多蛋白，结果就是膜上曝出的信号不好。
请问对于像我这么小的蛋白转印要注意什么呢？
我的转膜条件是：
半干转印，恒流0.8mA/cm2, 30-40min
转膜缓冲液是按照分子克隆配的，没有加SDS。

轰轰[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1-2MA/CM2 60-90MIN可能比较好.

轰轰[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般60分钟就够了。我都这么转的，还不错。

这个转印条件是0.2um的膜吗？
我用的是NC膜，说明书没有注明多大孔径的，可能是0.45um的膜，这样的膜是否可以用来转印16kd 的蛋白呢？

[ 本帖最后由轰轰于 2014-4-15 20:30 编辑 ]

wood533[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用小孔径的膜吧

小螺号[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做的是11.5KD的蛋白,湿转,转膜的条件是200mA,25min,用的是Bio-rad的电流仪.转的效果非常好.
你的16KD的蛋白我觉得同样条件转28min应该就可以了.膜是用的硝纤膜.

cocacola[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最好用0.22um的吧

轰轰[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

按照上面朋友推荐的方法又做了转印，结果转完后，胶考染仍然有很多蛋白没有转印过去，以前做这些更本没有这种情况，现在到底是哪里出了问题啊？

cocacola[使用道具]
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发表于 2014-4-15 20:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实如果你用的预染marker，转完以后掀开滤纸就能看到究竟转过去了没有。如果酶转好，盖上滤纸继续转就是了

dreaming[使用道具]
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发表于 2014-4-15 21:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议用0.22umPVDF膜，同等条件半干法转印60-90min 。