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标题:【分享贴】WESTERN BLOT中一个节约银子的新招

ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【分享贴】WESTERN BLOT中一个节约银子的新招

做WESTERN BLOT时，一抗二抗是笔不小的开销.我现在才发现有一个节约银子又增加实验效果的好办法，简言之，即是重复使用一抗和二抗.这样即可节约，多次使用还可以减少背景（我们实验室的一二抗可以重复使用一年以上，效果还很好哦！）.但我们现在用的是ODESSEY的荧光扫描系统，不知道用X光片的方法是否也同样管用.如果有战友试过，可以一同分享结果.

在特定的环境下，节约实验经费是很重要的啊！
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我就是不知道用封闭液(含5%脱脂奶粉的TBST)稀释的第一第二抗体到底能在4度放多长时间啊,你确认能放那么长时间吗,我都是放一周就扔了,看来很可惜哦
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
sorry，我忘了说了，我们用的是直接从公司买的blocking buffer，不是用脱脂奶粉配的，这样看来这个很重要了，如果是奶粉又不加防腐剂的话，应该是不能一直用一年的.不过如果把费用计算一下，看看是买blocking buffer贵还是买抗体贵，就可以作个选择了.
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯,我之前有看到过国内有个公司有卖这种blocking buffer,而且价格不贵,好像是50ml70块,呵呵,不过当时觉得抗体够用,而且说抗体只能存放一年,所以就没有买.抗体的保质期真的只有一年的吗?
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就这个新招啊,
重复用一年也太夸张了吧?!这也要看抗体的效价,就象一抗,,如果1:1000能做出来，但是是以1:100稀释的,确实能用很多次,每一次加一抗都是一次损耗,
用长时间了也不行,
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

时间用长了会长绿毛，呵呵。但是一般两三个礼拜应该没有问题。
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们一抗是１：２０００稀释的哦
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你在哪家公司买的Blocking Buffer？谢谢！
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是Odyssey公司的买的，一瓶500ml的要1800瑞典克郞吧，不过如果可以重复使用也就相对不贵了，尤其是节省一抗和二抗啊！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-4-16 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个也跟使用抗体的温度有关吧，我们一抗4度过夜，通常都重复使用
二抗室温，用完就扔。。。抗体在室温容易降解
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