【求助】有人作过免疫共沉淀结合2D吗

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标题:【求助】有人作过免疫共沉淀结合2D吗

3648755[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位:
有人作过免疫共沉淀结合2D吗?我现在想做这个方面,但是好象相关文献比较少,哪位大虾作过可否指点一二?

windy+++[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我猜想LZ的意思是说把这些共沉淀的蛋白复合体重新变性成单蛋白,然后跑2-DE.

utt0989[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

免疫共沉淀结合2D比较简单了，免疫沉淀后加2D上样叶把蛋白变性，直接作2D就可以了，没有什么难度。因为免疫沉淀杂质，盐分都比较少，所以比、细胞组织裂解液作2D容易成功。

tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

免疫共沉淀结合2D比较简单了，免疫沉淀后加2D上样叶把蛋白变性，直接作2D就可以了，没有什么难度。因为免疫沉淀杂质，盐分都比较少，所以比、细胞组织裂解液作2D容易成功。

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没那么理想D

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

主要问题存在于你使用抗体后，结合蛋白洗脱的方法：
1、如果使用常规洗液，盐分含量太高，需要进一步除盐；
2、如果使用裂解液直接洗脱，抗体轻链也会被洗脱下来，占有很高的丰度，影响聚焦。

remenb[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

beads 粘的非特异蛋白怎么办

hold住[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，难道做实验会没有对照组吗?实验都要有对照组，这是进行科学研究最最基本的概念。
如果方法可行，那么实验组和对照组两块胶进行差异分析，从理论上讲就可以去除非特异性结合的蛋白。

any333[使用道具]
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发表于 2014-4-16 15:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 hold住 于 2014-4-16 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

呵呵，难道做实验会没有对照组吗?实验都要有对照组，这是进行科学研究最最基本的概念。
如果方法可行，那么实验组和对照组两块胶进行差异分析，从理论上讲就可以去除非特异性结合的蛋白。 ...

恩，理论上可以去除非特异结合蛋白的影响。