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标题:【求助】Tricinr-SDS-PAGE中配制缓冲液是用Tris-HCL...

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发表于 2014-4-18 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Tricinr-SDS-PAGE中配制缓冲液是用Tris-HCL...


Tricinr-SDS-PAGE中配制缓冲液是用Tris-HCL，还是用Tris base?
我用的是Tris base，现在做胶的时候，老是不凝固。请教各位到底是什么原因会造成这种情况啊？AP和TEMED都是新鲜的。
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发表于 2014-4-18 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

tris-Hcl或tris base 都可以，关键是配制的凝胶缓冲液PH值要准，
胶不凝的原因如下：
1，AP或TEMED的量不够，可增加TEMED的量
2，试剂质量比较差，使用电泳级的试剂
3，AP和TEMED失活（AP一般不超过两周），配置使用新鲜的贮存液
4，聚合时温度太低，应将凝胶置于室温
或者检索本版：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/search?words=%B2%BB%C4%FD&c=0&mode=and&bid=65&username=&age=0&t=1&o=0&limit=20&action_search=+%CB%D1+%CB%F7+')
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发表于 2014-4-18 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你。
我想可能也是AP的原因吧。虽然是新配的，但是固体的好像有点受潮，溶解的时候也没有听到所谓的声响，换成新的再试试，有结果了我再和大家交流。
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发表于 2014-4-18 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
结果证明：是APS出了问题。我买了一瓶新的APS，换过之后胶就能在1小时左右凝了。多谢大家的帮助。
另外想问一下，浓缩胶凝的很慢，2个小时了还不好，而且胶收缩了很多，我插梳子的时候，溶液都溢出来了，结果2小时后胶少了很多，孔就变小了，这是为什么啊？怎样避免或弥补？
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发表于 2014-4-18 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓缩胶一般不超过35min就会凝固，浓缩胶更快了，是不是AP或TEMED的量加少了？你一块胶的体系多大，加了多少？
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发表于 2014-4-18 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我配了11.8ml的浓缩胶，加了10ul的AP和2ul的TEMED,少吗？
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发表于 2014-4-18 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚刚打错了，是配了1.8ml。
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发表于 2014-4-18 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那这种情况的话，这块胶还能用吗？
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发表于 2014-4-18 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉你的量还可以，体系是参考什么？宝生物目录上的不错，TEMED是什么时候的，会不会变质了，建议再配配看，增加量，放置室温，AP 15ul，TEMED 3 ul试试看，
看看下边的帖子，可能对你有帮助：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5658570_1.html')
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发表于 2014-4-18 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚才我咨询了一个同学，她说是因为浓缩胶没有密封好，与空气接触，怎样都不会凝了。是不是这个原因啊？我刚刚看了你建议的那个帖子，好像都没有说这个原因的，是不是和有气泡的原因是一样的？请赐教！多谢！
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