蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】SDS电泳样品中含有微量PEG，对电泳有多大影响？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】SDS电泳样品中含有微量PEG，对电泳有多大影响？

bamboo16[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79663
精华 2
积分 572
帖子 696
信誉分 104
可用分 4391
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
1

发表于 2014-4-18 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS电泳样品中含有微量PEG，对电泳有多大影响？


我的蛋白样品在经过PEG浓缩的过程中不小心混入了微量PEG，那该样品还能进行SDS电泳吗？有什么最简洁又损失蛋白两少的方法能出去样品中的PEG呢
顶部
zwsyrt[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79787
精华 0
积分 594
帖子 867
信誉分 100
可用分 5136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
2

发表于 2014-4-18 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种PEG的影响应该可以忽略不计的，浓缩时用到的PEG都是未经活化的，仅仅起到吸水的作用，并不会与蛋白质发生反应，它与我们做蛋白修饰时常用的PEG不是一个概念，用于修饰的PEG的末端羟基都被取代（活化）成活性基团以后才会与蛋白的氨基、巯基等发生反应。楼主的蛋白并没有与PEG偶联，而且跑电泳时取样也很小，所以它对目的蛋白的电泳的影响可以忽略。即便是偶联上PEG的蛋白质也可以跑SDS-PAGE电泳，只是条带有些弥散、分子量有些偏差而已，但这也常作为PEG修饰后偶联度的一个测量方法，简单快速就是误差比较大。
顶部
bamboo16[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79663
精华 2
积分 572
帖子 696
信誉分 104
可用分 4391
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
3

发表于 2014-4-18 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我昨天跑电泳了,效果很差,还很拖,不知道是不是PEG的原因,您帮我看看这张图吧


查看积分策略说明
附件
2014-4-18 15:34
43591049.snap.jpg (19.8 KB)
 
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
4

发表于 2014-4-18 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

中间条带弥散，应该是PEG的影响，不知楼主混入了多少PEG，我们以前浓缩时即便有点PEG也不会影响这么严重的，建议楼主把样品上一次分子筛或透析，除去多余的PEG。
顶部
bamboo16[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79663
精华 2
积分 572
帖子 696
信誉分 104
可用分 4391
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
5

发表于 2014-4-18 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的PEG分子量2万，不知道到底有多少，是在用PEG浓缩的时候不小心混入的，透析可能不能出去吧，只能用分子筛试试了
顶部
lxh031[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76425
精华 0
积分 335
帖子 389
信誉分 100
可用分 2726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
6

发表于 2014-4-18 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那用PEG 浓缩后的样品可以用来跑2DE吗？会有多大影响？
顶部
PINK[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73133
精华 0
积分 418
帖子 536
信誉分 100
可用分 3488
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-19
状态 离线
7

发表于 2014-4-18 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PEG浓缩不好。
量大用超滤膜包；量小用超滤离心管；
效果没问题没问题的。
顶部