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标题:【求助】做WB时蛋白浓度很稀,怎么办?

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做WB时蛋白浓度很稀,怎么办?

各位老师;
我做WESTERN BLOT 提的蛋白很稀,这是我仅有的蛋白,量还好,就是浓度低.
最后的条带颜色很浅,是我的条件不够,还是蛋白浓度低所引起的?
现在我怎么办?
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用DAB显色的,颜色很淡
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DAB能做到ng级就不错了，采用ECL做到pg级的
DAB显色时间长些呢？真正不行先浓缩蛋白，再做WB
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，怎么能浓缩蛋白呢？是怎样的方法？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
DAB能做到ng级就不错了，采用ECL做到pg级的
DAB显色时间长些呢？真正不行先浓缩蛋白，再做WB

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楼主这种情况中，条带显色深浅与DAB显色时间长短没有直接关系。
建议：
1、浓缩目的蛋白。可以以PEG或者蔗糖浓缩。
2、在没有其他杂带显色的情况下，提高一抗和二抗的工作浓度。
3、如果是用2×Buffer的话，最直接最方便的提高蛋白浓度的就是换用5×Buffer。这个只是提高量有限，但是很值得试试！
4、蛋白提取步骤上下下功夫，提高蛋白浓度！
Good luck！
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jiushikeshui371[使用道具]
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 小中大

请教楼上
１PEG或者蔗糖浓缩，具体怎么做？
２、5×Buffer？
３、采用ＥＣＬ能够增加条带亮度
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33号[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白浓缩简单的方法可以用超虑管过滤。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-4-19 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教楼上
１PEG或者蔗糖浓缩，具体怎么做？
２、5×Buffer？
３、采用ＥＣＬ能够增加条带亮度
......

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5×Buffer配方、浓缩方法到处都有，随便查都可以！
ECL可以提高灵敏度，但是有时候背景比较高！
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