【求助】小分子量的蛋白，SDS-PAGE电泳跑得很弥散

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标题:【求助】小分子量的蛋白，SDS-PAGE电泳跑得很弥散

langlang[使用道具]
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发表于 2014-4-19 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位高手，我跑细胞里提的全蛋白，15%的SDS-PAGE为什么15KD以下的蛋白都跑得很弥散呢，没有压成带？

langlang[使用道具]
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发表于 2014-4-19 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请各位指点，很急啊
而且感觉小分子的蛋白很少，考染只有很模糊的弥散

子衿青青[使用道具]
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发表于 2014-4-19 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 langlang 于 2014-4-19 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请各位指点，很急啊
而且感觉小分子的蛋白很少，考染只有很模糊的弥散

这是正常现象，通常SDS-PAGE胶的蛋白跑下来以后就是一个梯形，越靠下边越窄，而且比较弥散一些，跑得时间越长这个现象就越严重，这主要是由于样品自身的弥散（受热时加快）造成的，不过可以有办法减轻这种程度，跑胶的时候放冰浴，时间不要太长（目的蛋白跑到中间就行了)，上样量大点儿，另外，如果你的目的蛋白在15KD以下的话，15％的胶浓度太小了（也容易使小分子蛋白弥散），可以做18－22％左右的胶。

am10[使用道具]
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发表于 2014-4-19 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议提高胶浓度，检测缓冲体系PH值

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-4-19 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

凝胶里面加尿素，或者甘油会好一些

jujuba[使用道具]
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