【求助】有用过半干转移的请指教，谢谢

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标题:【求助】有用过半干转移的请指教，谢谢

qumm1985[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家好啊，院里刚买了台BIO-RAD的半干转移，在那闲置简直是资源浪费，我想向大家学习下怎么使用，可以么。。。。谢谢
顺便问一句，和湿转比在哪些方面需要注意啊
是不是转移缓冲液的配方也不同啊，呵呵

newway[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转移缓冲液是一样呀!!!!!
只不过湿转有一层海棉垫,干转无所以要多放几层滤纸(5层),再就是搞清正负极不要放反了.

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

负极到正极叠放顺序:滤纸，胶，膜，滤纸，大小一致或从下到上依次稍微小一点，滤纸要5-8张，少了容易短路，多了电流太小
电转液和湿转相同，但如果蛋白很小，不加SDS，增大甲醇浓度到30%-40%，可以用恒压12V-15V，转膜时间要自己摸索。最好一次转一张膜，否则容易短路，我试过几次转两张的都没有成功。转膜仪用后用自来水冲洗干净，晾干再合上盖子保存。摸索两次你就熟悉了，比较简单。Good Luck！

小游abc[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3楼说的基本正确了,但同时可以转多张膜,小胶的话最多可以转4张,说明书里也是这么说的.
我现在做很多的膜,一次转多张膜很正常,不过要隔一段距离.

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 小游abc 于 2014-4-19 22:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

3楼说的基本正确了,但同时可以转多张膜,小胶的话最多可以转4张,说明书里也是这么说的.
我现在做很多的膜,一次转多张膜很正常,不过要隔一段距离.

可能我隔得太近了，不过还是担心万一跑着短路了，几张膜不好再对齐，半干转得还是比较快，保险点还是每次一张吧

wawa[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们这上下各垫2张滤纸，对于分子量在10-200KD之间的蛋白，转印缓冲液不加SDS，恒压10V（或者观察电流，大约在2mA/cm2,稍小一点没关系），我们转印仪比较大，一次转印16张PVDF膜，效果一样很好。我们胶是6cmX8cm.半干法，平板电极，不存在短路的说法。先做吧，出现问题再发上来讨论，祝实验顺利。

glass[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有些不同的意见.
1. 胶和膜的顺序要看仪器,有的干转仪就是先放膜,再放胶的,胶在膜上面,主要看电极,
2. 至于短路,其实没这么容易短路,我转的时候,照着他们裁好的滤纸裁的,每次都很大,以至于两块滤纸接触,但从没有发生过短路现象,有可能仪器有防短路的功效,
3.一般干转仪都是高内阻的吧,所以推荐恒流,而两块膜是并联的,所以转两块膜时,设置的恒流电流比一块膜要加倍.至于用多大的电流,一般仪器说明书上都会有推荐的.

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 glass 于 2014-4-19 22:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有些不同的意见.
1. 胶和膜的顺序要看仪器,有的干转仪就是先放膜,再放胶的,胶在膜上面,主要看电极,
2. 至于短路,其实没这么容易短路,我转的时候,照着他们裁好的滤纸裁的,每次都很大,以至于两块滤纸接触,但从没有发 ...

1，人家说了是伯乐的啦
2，如果底板的液体有点多，滤纸少了，电流升到500mA（伯乐），短路
3，应该是膜的面积增大了一倍，预设的电流也要增大吧

biabiade[使用道具]
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发表于 2014-4-19 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们的半干转仪就是先放膜,再放胶的,胶在膜上面,也是biorad的