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标题:【求助】关于宝生物公司的低分子量蛋白Marker的问题

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发表于 2014-4-19 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于宝生物公司的低分子量蛋白Marker的问题


大家好，我最近原核表达，已经有表达出来，但是在跑电泳的时候，感觉Marker不太对劲，我表达的蛋白是44KD，带有his-tag.用了宝生物公司的低分子量蛋白Marker作对比，发现Marker只跑出了4条带（本应该有6条带的）。而我的目的条带现在正好出现在第二条带附近（如图所示，左边第一道即为Marker，从Marker开始数起，第2，3，4，5分别为诱导1h,2h,3h,4h后的条带），目前的问题是这个Marker的第二条带是44.3KD的呢，还是66.7KD的，难道是66.7KD的与最高的那条97KD的没跑开？如果是这样，那么第二条带就应该是44.3KD的，与我的目的条带相符，不知道大家有没有用过宝生物公司的低分子量蛋白Marker，帮忙分析一下，这个Marker的第二条带应该是多少大小的？附上我的电泳图及这个Marker的标准图。谢谢
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发表于 2014-4-19 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是我的电流图。


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发表于 2014-4-19 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
附上一张这个Marker的标准图。


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发表于 2014-4-19 22:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，我的电泳图，从marker左右开始起的条带应该是未诱导的，诱导1h,2h,3h,4h的。呵呵
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发表于 2014-4-19 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Marker应该混匀后再分装，好像使用前要加热才能用吧？我觉得是没有混匀，也有可能是Marker质量不行。宝生物的没有用过，我们用的是天根的和上海生化所生产的。你没有诱导空载体吗？这个要做，然后来判断目的片段大小对不对，而且诱导时间相隔太密了，我们一般是2
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发表于 2014-4-19 22:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是按照他说明书书操作的，煮沸后分装。空载忘了对照了，呵呵。温度我用了30度和37度的都有表达，但是我对沉淀和上清跑了电泳结果都在沉淀里。不过我是拿这蛋白用作抗原来免疫动物，如果是包涵体的话应该也可以吧？
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发表于 2014-4-19 22:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议加大marker用量试试。
诱导可以搞个20度的，诱导时间长一些，尽量让它可溶吧，这样纯化容易些。如果是包涵体也可以，可以用尿素或盐酸胍溶解过柱纯化。
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发表于 2014-4-19 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩，谢谢greenbee的建议，呵呵。我再用低点的几个温度试一下看。
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发表于 2014-4-19 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的胶浓度是多大啊?
一般宝生物的low mark跑6~8ul
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发表于 2014-4-19 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我胶浓度是10％的。我marker上样量为5ul.
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