小中大【分享帖】蛋白质电泳电转时的几个新招,不看后悔
以前在国内做western blot的时候,在做电转的过程中,发现实验手册上的一些要求比较难以达到,比如做“三明治”夹膜的时候,书上要求滤纸和胶以及PVDF膜必须精确对齐(并且据说是如果不对整齐的话会导致短路,使蛋白不能转移到膜上),并且没有气泡,这样就让人不得不把膜夹好后,还要拿起来用剪刀把滤纸等的多余出的部分进行修剪,但做过的人都知道,这是个费力不讨好的活,经常是剪不整齐,而且会导致本来没有气泡的膜反而会带入新的气泡,费时费力,时间增长也会导致吸入更多电转液中挥发出的甲醇,总之两个字:不爽!
现在出国了做Western blot比较多,发现有很多改进的地方,归纳如下,希望对战友们有所帮助,如果觉得真的有用,帮忙把帖子顶一下!
1、做电转时,滤纸、胶和PVDF膜的尺寸不必绝对一致。只要滤纸>=PVDF膜>=胶就行了,不会短路的,我做过多次了!PVDF膜可以事先按胶的尺寸裁剪好,当然也可以直接买现在的,看银子多少而定了。
2、因为不需要剪滤纸,所以赶气泡的活就是a piece of cake了。只需要依次把平衡好的胶和膜放上去就行了,只要没有气泡,不要不停地用玻棒等去赶气泡了,不然胶容易变形,出来的蛋白质条带会变弯的。
3、电转液是可以重复使用的!虽然使用久了的电转液在电转的过程中发热情况会比较厉害,但效果依然不错,我好象都用了十几次了还可以继续使用呢,这也是比较节约银子的了,而且不用总去配试剂啊,省事!
暂时把最有用的几招写在这里,希望对你有用!