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标题:【求助】怎样才能知道SDD-PAGE胶上面的蛋白条带全部转到NC...

扫雷军kuzi[使用道具]
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【求助】怎样才能知道SDD-PAGE胶上面的蛋白条带全部转到NC...


如题,谢谢各位。
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101010[使用道具]
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1 把跑完胶的PAGE胶考染一下
2 把NC膜用丽春红染下,不影响后续实验。
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扫雷军kuzi[使用道具]
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回复 #2 101010 的帖子

你的意思是说:把跑完胶的PAGE胶考染一下,如果还有蛋白条带,说明转膜不完全。
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seagate[使用道具]
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用预染marker吧,虽然稍微贵了点,但是转完膜可以直接看到啊,marker转完了,你的样品也差不多了。
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101010[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 扫雷军kuzi 于 2014-4-19 23:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的意思是说:把跑完胶的PAGE胶考染一下,如果还有蛋白条带,说明转膜不完全。

我是这个意思的
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youreyes[使用道具]
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有时候,预染的marker全转过去了,一染胶,还是有很多的蛋白残留,是不是上样量过大啊。
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预染MARKer的转过去了,是不是代表上样的那个目的蛋白也转上去了呢?
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也不一定的
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ROSE李[使用道具]
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预染MARKer的转过去了,是不是代表上样的那个目的蛋白也转上去了呢?

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只能说,目的蛋白肯定有部分转过去了,但是否完全,这不好说。
但是,对western blot来讲,只是一个相对定量,目的蛋白除了和内参(actin等)做校正外,还要组间进行比较。各泳道蛋白的转膜效率是基本一定的。
因此,即便目的蛋白只有部分转到膜上,其组间差异还是可以表现出来的。
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windboy[使用道具]
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转膜后染胶有条带很常见,不可能每次转膜都那么理想,正好把所有蛋白都转过去了。你可以一次跑两块胶,一块转膜,一块考染,转完膜的胶再考染,看两块胶的颜色差异,可以大略知道。
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