【求助】cDNA的结构？

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标题:【求助】cDNA的结构？

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请各位指点：由RNA逆转录得到的cDNA是双链还是单链？具体结构是什么

u234[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

cDNA以双链的形式存在，以DNA单链-RNA单链或DNA单链-DNA单链两种形式。但其定义本身不包括单双链。见下。
cDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写，或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA，以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由依赖RNA的DNA聚合酶（反转录酶）的作用而合成，并且在合成单链cDNA后，在用碱处理除去与其对应的RNA以后，以单链cDNA为模板，由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA，在遗传工程方面广为应用。在这种情况下，mRNA的cDNA，与原来基因的DNA（基因组DNA，genomic DNA）不同而无内含子；相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上，与exson序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

cDNA稳定吗？容易降解吗？通常怎么保存？

耗子===[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

通常放-20就可以了，最好分装，不建议反复冻融

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前辈：我还有一个疑问就是，使用逆转录试剂盒以RNA为模板得到的
cDNA未经处理，它也是以双链形式存在吗？因为我听同学说必须再经过另外一种酶，合成另外一条DNA单链，才能够形成双链DNA，这种说法有道理吗？期待您的回帖！！！

耗子===[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA.再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达.RT-PCR使RNA检测的灵敏
Rt-PCR的结果得到的就是双链DNA