【求助】有人做western遇到荧光淬灭的现象吗？

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标题:【求助】有人做western遇到荧光淬灭的现象吗？

whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用辣根酶标记的二抗，加了显色液后，荧光几秒之间消失，来不及暴光
再加些显色液，仍然淬灭
用同样的条件一次转2块膜，竟然有时会一块淬灭一块不淬灭
找不到原因，急死了

wood533[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，请问你得一抗，二抗比例是多少啊，
1，2抗浓度过大我认为会出现这种情况，
2 建议挑选合适得保鲜膜
3 适当延长洗膜时间
呵呵，说得不全，请多指教
祝实验顺利

whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 wood533 于 2014-4-21 10:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你好，请问你得一抗，二抗比例是多少啊，
1，2抗浓度过大我认为会出现这种情况，
2 建议挑选合适得保鲜膜
3 适当延长洗膜时间
呵呵，说得不全，请多指教
祝实验顺利 ...

谢谢～二抗用的和以前一样的浓度，这段时间经常淬灭，降低过二抗浓度，结果仍然不是太好
洗膜都是洗过夜的，5555555

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发表于 2014-4-21 10:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

能看得到荧光，说明还是可以的，不要多考虑这个问题，赶紧抓紧时间，压片子要紧。

lixi559[使用道具]
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发表于 2014-4-21 10:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到过这个问题，后来发现是一抗失效了，换了一抗就解决了，所以，你可以看一看是不是一抗或是二抗失效了。

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发表于 2014-4-21 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到过这个问题，后来发现是一抗失效了，换了一抗就解决了，所以，你可以看一看是不是一抗或是二抗失效了。

whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-4-21 11:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 lixi559 于 2014-4-21 10:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我也遇到过这个问题，后来发现是一抗失效了，换了一抗就解决了，所以，你可以看一看是不是一抗或是二抗失效了。

嗯，也许是二抗变质了。。？
还发现一个问题，就是一张膜如果淬灭过，再洗膜杂其他抗体也会淬灭

whitesheep[使用道具]
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发表于 2014-4-21 11:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 831226 于 2014-4-21 10:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

能看得到荧光，说明还是可以的，不要多考虑这个问题，赶紧抓紧时间，压片子要紧。

来不及……
还没拿出片子，刚吸掉多余的显色液，盖上塑料膜就消失啦
每天关在小黑屋里，看着荧光淬灭，绝望的心情可想而知◎◎

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发表于 2014-4-21 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二抗浓度过大，含HRP标记的二抗会在短时间内消耗掉ECL，从而会出现荧光很快淬灭的现象，建议调低二抗浓度

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发表于 2014-4-21 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得用肉眼能看到荧光的话，就是实在荧光太强过头了……
你说的淬灭是指眼睛看不见还是指压片没有条带阿？

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