固相萃取

我做药物动力学，样品是易溶于甲醇，溶于二氯甲烷，乙醚，难溶于水。用的是C18固相萃取小柱。操作步骤：血样先酶解，离心，取上清液。活化：用2毫升甲醇活化，2毫升水平衡;上样：将处理好的上清液上柱;淋洗：待上清液全部通过小柱后用2毫升水淋洗;洗脱：2毫升甲醇洗脱，收集洗脱液，挥干，用0.2毫升甲醇复溶，进样。结果回收率大概50%，比之前直接用二氯甲烷萃取低很多，另外杂质也没有除掉到理想的效果。因为之前用液-液萃取(已经试过氯仿，二氯甲烷，乙醚，乙酸乙酯)，杂质较多，所以改用固相萃取。

个人认为你的洗脱除杂过程太过如简单，可否考虑在用甲醇洗脱前先用一定浓度的甲醇水溶液除杂，这样即可以除去部分杂质，也可以使样品向小柱下端迁移，利于以后的洗脱。

以下为本人个人做法，仅供参考：先用对照品配制一个与血样浓度相近的水溶液，柱活化后上柱，先用水淋洗，然后从5%的甲醇水溶液1ml开始，以10%浓度递增，每浓度1ml，分别收集淋洗液，水浴N2气挥干后复溶后进样分析，考察样品在那个浓度下被洗脱下来。假定在65%甲醇淋洗液中测及了样品，那正式试验时我的淋洗除杂过程会如下设计：水1ml、15%甲醇1ml、50%甲醇1ml，这样可最大限度除去杂质。

另外样品回收率低有可能是用2ml甲醇不能完全将样品洗脱下来，用什么样的洗脱液洗脱样品，用多少量这都需要试验来验证，有时不一定非要用甲醇，用一定溶度的甲醇水溶液或其它溶剂可能更好。

我也做过类似的简单萃取，因为我们最后是用氮气吹干的，我当时分析回收率低也可能是物质分子量低，在2ML洗脱液中被吹跑了，可以在洗脱液甲醇中加点酸或者碱使物质成离子状态，这样就没有被吹跑

我按上面楼主的方法做过，发现用15%的甲醇淋洗，就有样品检测到，故我改用先用1毫升水淋洗，再用10%的甲醇淋洗，然后用甲醇2毫升（每次用1毫升，分两次）甲醇洗脱，发现杂质还是没有被洗掉，感觉和之前的差不多，且回收率也是不高，50%左右

你所要萃取的物质用C18小柱也许不合适，因固相萃取小柱的种类很多，是不是可以换其它种类的小柱试试？最近我也遇到做药物动力学的，用其它的小柱做起来效果倒好一些。