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标题:【求助】2D图像

11_hjx[使用道具]
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发表于 2014-4-26 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】2D图像


17cm，pH4-7，上样700ug，聚焦58000vhours，二向80v60min，200v4h
凝胶的下半部分几乎没什么点，而且点的形状较上半部分不规则的多，这是怎么回事啊？另外近酸性端聚焦也有问题：（。跑7cm的时候没有这种情况，请站友们帮忙阿！！！


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2014-4-26 16:56
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-4-26 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二向跑的不够，明显没下来．
你的图有纵条纹，说明你的一相聚焦也没聚好．
建议适当延长聚焦时间和二相分离时间．
这图跑的实在不漂亮．
加油，你会成功的
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bring[使用道具]
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发表于 2014-4-26 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一向没聚焦好，多会产生横纹。纵纹可能原因有：试剂不够“干净”，硫脲影响，二向电压或功率太大等。你的上样量很大，但点如此少可能是平衡没做好。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2014-4-26 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上有说：一向没聚焦好，多会产生横纹。纵纹可能原因有：试剂不够“干净”，硫脲影响，二向电压或功率太大等。你的上样量很大，但点如此少可能是平衡没做好。 、
请问硫脲会影响纵纹？
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发表于 2014-4-26 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也有可能胶没有凝好!或者是TRIS不纯,就是4倍分离胶缓冲液不好的原因
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发表于 2014-4-26 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的分离胶缓冲液倒是很久以前配的，重新配再试试看！谢谢各位站友！
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tewank[使用道具]
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发表于 2014-4-26 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
bio-rad手册上说加硫脲会产生纵条纹;17c m酸性端跑这样不算问题;偶们这跑2向一般是恒流.如果觉得一向聚焦不够充分,可以适当的调大聚焦电压(如:8000升到10000)
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11_hjx[使用道具]
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发表于 2014-4-26 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的蛋白是用含有硫脲的裂解液提的，所以用水化液中也加了硫脲，有没有可能这也是其中的一个原因呢？
如果不加硫脲，只用尿素，是不是会提高一向和二向的效果啊？
请各位站友不吝赐教哈：）
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wanglaoshi[使用道具]
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 小中大

裂解液里加硫脲，水化液里也是要求要加的。硫脲可以很好的溶解疏水性蛋白。不过最好使用进口硫脲，国产的如果质量纯度不过关还会产生假点呢。
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发表于 2014-4-26 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得不是硫脲的原因。我原来也用硫脲，也产生纵条纹，但不像你这样。
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