生物实验技术

　　1)高分子量DNA琼脂糖凝胶块制备和加工

　　1.收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。

　　2.2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。

　　3.稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞。

　　4.用PBS重悬细胞，以达到40μl PBS中含1百万个细胞比例(1百万个二倍体哺乳动物大约含有基因组DNA 10μg)

　　5.用PBS配制2%浓度低熔点琼脂糖溶液并保持在50℃。

　　6.将等体积(各1ml)细胞悬液与琼脂糖溶液于室温下混匀，立即倒入凝胶块模具中。

　　7.静置20min让琼脂糖固化，用无菌塑料杯(通常用作划菌)将凝胶块自模具中取出并置入蛋白酶缓冲液中，加入2mg/ml的蛋白酶K。

　　8.将带有凝胶块的蛋白酶K缓冲液于50℃保持2～3天。每个盛有50ml蛋白酶缓冲液的Falcon管可容纳多达100个凝胶块。

　　9.蛋白酶K消化后，可将凝胶块保留在此缓冲液或0.5mol/L EDTA溶液中保存于4℃。

　　10. 此外，继续将凝胶块用高压消毒过的TE缓冲液冲洗数遍的步骤。

　　11. 将凝胶块放入装有TE及0.04mg/ml PMSF溶液的Falcon试管中，灭活残留的蛋白酶K。