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标题:【求助】SDS-PAGE蛋白电泳

guagua[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE蛋白电泳

各位大侠请帮我分析一下，电泳怎能跑成这样呢?用的是4%的浓缩胶，12%的分离胶，左面是蛋白标品和样品，右面5个泳道是样品缓冲液，下图是样品在浓缩胶状态，下一个是进入分离胶的情况，再下一个是快跑完的样子，共三个帖子，拜托了…… 具体参见
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?age=0&bid=65&ppg=1&sty=1&id=9150496&tpg=3')


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guagua[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品进入分离胶的情况，即是本帖内容

样品跑完时的状态，怎能使这样呢？我是整不明白，有点晕啊！具体参见：
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好多气泡呀，可能影响比较大吧
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好像前导离子有问题啊，溴酚蓝前沿不对啊！
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想问什么啊?
是问为什么不齐么?
有可能是配胶的时候没配好导致胶的密度不均一,
也可能是你的样品中含大量的盐或尿素一类的!
不过似乎并不影响做实验,如果歪也会歪成一条线,不影响分析结果.
不过你的两层胶之间有很多小气泡,这会导致结果不好,是你把胶放置的时间太长呢?还是用水压平的时候压的太猛,难到是你的板子没洗干净?......
总之如果有气泡最好就不要跑了,从新配吧!
最后,胶最好不要刚配好马上用!多放一会会!使SDS凝的彻底.
胶也不要放在低温,即使是4度的冰箱时间太长,否则SDS会析出!
都会影响结果的
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发表于 2014-5-6 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那些气泡不是胶之间的，是缓冲液和电泳槽产生的，胶是没有气泡的，我就是不明白为啥前沿跑不齐？楼上说的我都注意到了，就是胶配好后马上灌的，如过一会再灌，就在烧杯里就凝了，还有没有其他原因了？
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发表于 2014-5-6 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加入分离胶或基层胶的时候,一次性快速加完.水封时,水不要吹的太猛,容易把胶的液面吹成上面的样子.
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问一句，确定你的 浓缩胶浓度 配对的吗？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-5-6 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为是因为电泳槽下面有气泡的原因，建议你在跑电泳之前先用电吹风将底下气泡赶走。
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guagua[使用道具]
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 小中大
会不会是电泳缓冲液出问题了，最好重新配一下看看。
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