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标题:【求助】PAGE电泳时应该怎样选择电压大小？

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发表于 2014-5-6 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PAGE电泳时应该怎样选择电压大小？

各位高人，请问PAGE电泳时应该怎样选择电压大小？时间怎么定？谢谢
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-5-6 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

60V进胶，90V浓缩胶，120V分离胶即可。每种电压的持续时间可通过观察溴酚兰前沿决定
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喵咪[使用道具]
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发表于 2014-5-6 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有文献上用的是恒流的，我曾经用过20mA浓缩胶，30mA分离胶
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-5-6 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电压及时间应根据你试验的所需目的蛋白的分子量而定.
我试验所需的核蛋白NF-KB的分子量是65KD,跑电泳时浓缩胶是100MV,15分钟;
分离胶是200MV,30分钟,跑了几次结果都还不错哦!
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-5-6 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们做的也是恒流，20mA。
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发表于 2014-5-6 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的是50KD左右的,浓缩胶80V,40MIN,分离胶110V,时间是60MIN.
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33号[使用道具]
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发表于 2014-5-6 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
忘了说明一点是,我做的恒压的.
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发表于 2014-5-6 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电压大则电泳快，分辨率高
但不能使体系温度过高
其实就是在温度和电压之间找一个平衡
其他实验室用的参数不一定适合你
比如，不同实验室用的胶长度不同，用相同电压得到的效果就完全不一样了
平时可以注意一下温度和电压电流，摸索出恰好不使温度过高的功率（电压X电流）值-------这个和实验室温度以及电泳槽散热性能有关。
以后再设置时让功率低于这个值即可。恒流和恒压效果没什么区别
有人推荐分离胶和浓缩胶用不同参数，以我的经验看，对于小胶，完全没必要，一个电压跑下来就可以了
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