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标题:【分享帖】质谱影像技术的原理与应用

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发表于 2014-5-6 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【分享帖】质谱影像技术的原理与应用


常规的体内分子影象技术（in vivo molecular imaging)如ＭＲＩ、ＰＥＴ和near-IR　fluor escent imaging虽然可以动态观察生物体内的活动,比较费时间，只能同时监测一种分子的表达情况，并且不能标记未知蛋白
经典的蛋白组学策略如２Ｄ＋ＭＳ虽然可以一次分析数以千计的蛋白质（含未知蛋白），但过程繁琐，而且对蛋白质在细胞或组织内的分布无能为力.
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发表于 2014-5-6 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

发展历程－离子显微镜？
３５年前Castaing and Slodzian提出了使用质谱构建分子影象的设想。（一个类似于光学显微镜中的透镜的离子－光学收集系统）
而后质谱影象技术应用于分析化学的各个领域
1997年Caprioli and co-workers率先在分子生物学领域应用了质谱成像技术
Caprioli, R.M.; Analytical Chemistry, 1997, vol. 69, issue 23, p 4751
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发表于 2014-5-6 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

技术和设备要求
１，分析微组织块所需的激光束的能量高于常规的ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ至少１.5倍
２，光源由普通的N2激光器修改为ＮＤ：ＹＡＧ激光器，脉冲频率提高约３００倍
采用特殊的分析软件包(MALDI－MS Imaging Tool, MMSIT)和基于linux的‘‘BioMap’’工作站并由后者产生分子影象
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发表于 2014-5-6 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

技术原理


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发表于 2014-5-6 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在微组织样品上的扫描示意图,黑线示一条由连续激光点连接而成的扫描线.


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发表于 2014-5-6 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如图,通过激光在样品表面扫描,而后软件进行自动分析,可以构建具某一质荷比(分子量)的蛋白质(肽段)在组织样品中的空间分布图.
该图象来源于2001年nature medicine的一篇文章.


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发表于 2014-5-6 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

优点：
高通量－同时根据蛋白指纹图谱（肽指纹图谱）鉴定成百上千的蛋白质并观测感兴趣的目标蛋白在组织和细胞中的分布。
高兼容性－可直接以组织片或细胞（细胞团）进行分析
高灵敏度－分析含量低至Amol的调节蛋白成为可能
同时分析蛋白质的各种异构体、不同修饰状态和不同的代谢片段
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发表于 2014-5-6 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缺点：
线性范围不够宽，适用于样品间相同蛋白质的比较，而不适用于样品内不同蛋白质的比较（受不同蛋白离子化效率的影响）
重复性易受样品处理、基质包埋等过程的影响。
对于大分子量蛋白质的分辨率相对较低
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发表于 2014-5-6 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在组织样品上的首次应用
方法:先把微组织块转印到表面包被有C18珠的MALDI样品盘上(或者把显微切割后的微组织块直接置于样品盘上)
使用大鼠胰腺组织和垂体组织成功检测到了约50种蛋白质(包括前体分子、异构体和代谢片段）
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发表于 2014-5-6 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

获得的蛋白指纹图谱及鉴定的蛋白质列表


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