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标题:【求助】关于肝素琼脂糖亲和柱

youyou99[使用道具]
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发表于 2014-5-7 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于肝素琼脂糖亲和柱


各位达人，请问谁有sigma公司的肝素琼脂糖6FF的使用说明书，主要想了解一下，他们将肝素结合到琼脂糖上使用的方法以及贮存方法。谢谢。
另外想请教一下有谁用环氧氯丙烷在琼脂糖上引入环氧基团？想问一下这种基团接合胺基会不会被乙醇破坏掉，为什么？万分感谢。
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发表于 2014-5-7 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

sigma的这个产品介绍中应该有,我看到的是用溴化氰活化填料偶联肝素的,保存一般是20%乙醇中就可以.环氧基团和氨基反应非常稳定,不会被乙醇破坏掉的. cuturl('www.wsac.cn') 资料下载中有肝素琼脂糖凝胶说明书可以供你做使用参考.
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发表于 2014-5-7 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外想请教一下环氧基团和氨基反应属于什么反应，国外有文献报道用还原胺化法制肝素亲和柱，最终是用叠氮钠保存，并未用乙醇保存不知为什么？
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发表于 2014-5-7 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实你看到的文献还原胺化法制肝素亲和柱应该是先环氧化，然后再氨基化，填料上就带氨基，反应应该属于亲核反应．剩下的问题是怎么样利用肝素上的基团和氨基反应的问题，用叠氮钠保存当然就不需要用乙醇，其实只是习惯不同而已，有的时候配基不稳定的话，那选择叠氮钠对维持生物活性也许更好点．所以关键还是看配基的类型．但是通常固定后的生物大分子更稳定了，所以２０％乙醇保存大多填料都应该可以．
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youyou99[使用道具]
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发表于 2014-5-7 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

实际上是这样的，94年姜世明等研究了，琼脂糖4B经环氧氯丙烷活化后，直接连接肝素从而制成亲和柱，然而这种亲和柱在乙醇中很快失去亲和力，并且6M的脲也对之有破坏，而肝素本身就是聚己糖胺，我想他们的这种方法形成的键中可能含有不少肝素上的氨基与环氧基团形成的键. 而我想将肝素连接到胺化琼脂糖时要用到乙醇，这样就有可能将环氧基团与氨基形成的键破坏掉,所以现在很矛盾。
另外我在cuturl('www.wsac.cn')上并没有找到heparin-sepharose 6FF的说明书，只有其他的肝素亲和柱，而不同的琼脂糖类型所用的亲和肝素的方法是不同的，请问cwcwcww能找到它的说明书吗，能传给我一份吗,万分感谢。
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-5-7 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

琼脂糖4B经环氧氯丙烷活化后，直接连接肝素这个方法很难成功,而且肝素本身是没氨基的,所以我觉得未必可靠,即使能连那载量也不够高, cuturl('www.wsac.cn') 中的肝素琼脂糖凝胶的说明书能兼容heparin-sepharose 6FF没问题,至于进口说明书我发一份给你吧,都是保存在20%乙醇中的.
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发表于 2014-5-7 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下，肝素亲合柱结合的蛋白具有什么样的性质
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-5-7 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

通常都有文献报导有肝素结合位点,也可以用于和DNA结合蛋白的纯化.
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