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标题:【求助】为什么有的样品溴酚蓝变色了

12xunmei[使用道具]
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发表于 2014-5-8 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么有的样品溴酚蓝变色了


我将BT菌在GT液体培养基中培养后收集菌体，用1M NaCl悬浮后离心，再用超纯水悬浮后离心去上清，然后加入50ul 200mM NaoH处理10分钟后，加入5X上样缓冲液，煮10分钟后，放入4度冰箱备用。第二天，准备跑SDS-PAGE时，发现有的样品的溴酚蓝变色了，而有的又是正常的，如图，请问大家是怎么回事呢？问题出在哪？


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2014-5-8 15:12
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发表于 2014-5-8 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

溴酚蓝在酸性溶液中会变成黄色,也就是楼主所示的变色的管子的那种颜色.
至于为什么有的管子变色有的不变,因素也太多了吧.我曾经把loading buffer放置室温过夜,有时会变成黄色,有时就没有事情.总之,可以肯定的是,变色的就是体系的ph已经发生了变化.不知楼主为什么煮沸后第二天再上样,我们都是上样前才煮沸的.
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发表于 2014-5-8 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为样品太多，处理后一天跑不完，所以才第二天跑的，跟这个有关系吗？为什么同一批处理，方法相同，有的要变，有的不变呢？真的是体系的PH值影响吗？这样对蛋白有影响吗？是不是蛋白都降解了呢？
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-5-8 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pH的问题
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发表于 2014-5-8 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tangxin_80 于 2014-5-8 15:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

pH的问题

真是PH值的问题呀?那为什么同一批中，加的溶液一样，有的要变，而有的又没变呢？
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发表于 2014-5-8 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也碰到了这个问题.
我是用毕赤酵母来分泌表达蛋白的，诱导表达72h后取上清进行浓缩,然后取5ul样品与5ul 上样缓冲液混合来跑SDS-PAGE. 发现有的样品出现如楼主所说的黄色.但是将样品加进点样孔后,黄色逐渐消失,而变成蓝色!
实在搞不清是什么原因,请高手帮忙解释.谢谢
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发表于 2014-5-8 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的加进点样孔也没变成蓝色呀，还是黄色的，怎么回事？
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发表于 2014-5-8 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就奇妙了,
应该来讲,样品变黄,但加入点样孔后会变回蓝色,因为电泳buffer是碱性的.但楼主的还是没变色,呵呵,我也期待有高手
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发表于 2014-5-8 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是样品过酸，加NaOH就OK了
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-5-8 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到这种情况，也变成黄色．就是pＨ的原因．
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