【求助】激光捕获微切割后做蛋白组学，是否只能用冰冻...

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标题:【求助】激光捕获微切割后做蛋白组学，是否只能用冰冻...

zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

正在做实验设计，请各位战友赐教。
我的实验设计采用组织切片后免疫组化染色，然后利用激光捕获微切割提取阳性细胞，再做蛋白组学研究。
请问组织样本是不是只能用冰冻切片？？固定后石蜡切片的样本可以做蛋白组学不？？我看文献上，石蜡切片都只做基因表达，没有做蛋白的。
多谢！！

831226[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 zsxan1990 的帖子

我觉得应该可以吧。反正按照蛋白纯化的过程来呗，石蜡和蛋白的性质又不一样应该可以分离，可能的影响是石蜡影响了细胞的生理特性了吧，也就是说石蜡处理后影响较大得到的鉴定到的蛋白与实际状况可能有较大差别吧。但是量可能是个问题。

zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 831226 的帖子

组织固定后，蛋白不是变性了吗？？

hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，你觉得用石蜡可以吗？你不是要分析蛋白吗，一般讲在室温下30min蛋白会损失将近70%以上，酶类基本全部失活，你分析这样样品的蛋白有用吗？LCM很烧钱啊，样品处理是关键。

zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是这样想的哈，多谢了，
要是不能做石蜡的，只做冰冻的话，实验设计就得改了哦

qqq111[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也打算要做LCM＋蛋白质组，现在还没有什么头绪，不知道楼主是否用2－DE？不知道要多少细胞数啊？

qqq111[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做蛋白质组不怕酶失活得反正得用胰蛋白酶酶切

yes4[使用道具]
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发表于 2014-5-9 10:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得不行，首先，蜡块的制作是要求将标本最后放到60度左右的蜡槽里近真空状态下，放置一晚上。这种情况下，蛋白的立体结构虽被固定了（可以做免疫组化），但是蛋白却变性了而且一旦变性后，基本不再有可能作2-D。也就不可能做蛋白组学了。
我现在做的是，将同一份标本分两部分，一分制成蜡块作基因表达，免疫组化。另一份专作2-D。