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标题:【求助】蛋白上样的问题

ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白上样的问题


请问大家：我在做SDS-PAGE进行蛋白上样时，BL21有时会很粘稠，很难吸上来，并且不会沉到梳子孔道下，往上漂。今天作了诱导，蛋白的全菌体也出现了这种情况。大家帮我分析一下，是怎么回事啊。谢谢
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是上样缓冲液的问题吧，是不是甘油加少了？甘油起了使样品沉降的作用
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缓冲液没有问题呀，其他的蛋白上样都正常阿
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是形成了一些DNA团快，不知你采用的什么破碎方法，破碎的彻底一些会有所改善。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能你的DNA还没有被打断，所以比较粘稠。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的样品里有没有有机溶剂？
一般有有机溶剂时回出现这种情况．
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如过确定是有机溶剂的问题的话，可以在加热时将有机溶剂挥发出去就可以了．
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加热10分钟
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summerxx[使用道具]
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发表于 2014-5-9 20:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般沸水煮10min，然后12000离心3min，取上清上样
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