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标题:【qiuzhu 】SDS-PAGE跑出锯齿 求解决方法 有图

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发表于 2014-5-10 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【qiuzhu 】SDS-PAGE跑出锯齿 求解决方法 有图

看过分析百科里有过跑出锯齿的帖子 都尝试改进过 可是还是无济于事 求助希望
战友能伸出援助之手，救我于水深火热之中 感激不尽
尝试的改进方法
1 减少上样量 从15微升减到10 上样前离心
2 Tris HCL Runing buffer 和AB 都重新配的
3 配制胶的时候很注意混匀 有过SDS-PAGE的经验 所以还是相信自己配胶的技术
谢谢您
附图


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2014-5-10 15:29
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fox_79[使用道具]
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发表于 2014-5-10 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
装梳子的时候是否有气泡产生，玻璃是否清洗干净？
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发表于 2014-5-10 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回答 楼上的问题 可以肯定不是您提到的问题 做的时候很注意
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-5-10 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
缓冲液的pH值有没调对？
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12xunmei[使用道具]
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发表于 2014-5-10 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


1、电压是不是太高了，导致温度过高。
2、配胶时，在胶底会不会有气泡。
3、样品中含盐过多。

[ 本帖最后由 12xunmei 于 2014-5-10 15:35 编辑 ]
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发表于 2014-5-10 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

I met this problem before. I didn't know the actual reason.
but as for my protein, the following western detection was not affected by this problem.
And I noticed that this problem happens when I use different kinds of Loading buffer.
Sometimes I used my homemade loading buffer+DTT, there was no such problem; Sometimes I used Biorad loading buffer+betaME, this problem occured.
I am sure this does NOT neccessarily mean which loading buffer is better, but it could be a possible lead to follow. excuse me for the English.
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发表于 2014-5-10 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从你的PAGE图上基本可以断定是由于你的缓冲液PH问题,
因为只有下面部分的条带锯齿状, 而且从左到右笑脸逐渐变小。右边的比较好。如果你是这个点样顺序的话，再做时观察点样后样本是不是有扩散或者向上弥散。就可以确定这个原因了。
而且下面的蛋白条带也不是很整，你也检测一下PH6.8的TRIS是否失效，这个也可能导致蛋白条带不整。
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发表于 2014-5-10 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.从marker的电泳情况来看，你的电泳系统没有太大问题。
2.从样品的电泳情况来看，泳道中存才很多”竖线“，说明你的样品中含有大量的核酸，这是造成锯齿的主要原因。
3.可以考虑尽量避免样品制备中核酸的污染或者后期除去核酸。
4.每个泳道中蛋白质上样量太大，降低到原来的1/2—1/4（具体量需要摸索），可能会有改观。
个人观点，仅供参考。
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发表于 2014-5-10 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 大海啊故乡 于 2014-5-10 15:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1.从marker的电泳情况来看，你的电泳系统没有太大问题。
2.从样品的电泳情况来看，泳道中存才很多”竖线“，说明你的样品中含有大量的核酸，这是造成锯齿的主要原因。
3.可以考虑尽量避免样品制备中核酸的污染或者后期除去 ...

怎样去除样品中的核酸呢？ 谢谢
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大海啊故乡[使用道具]
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发表于 2014-5-10 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.可以尝试在加完样品处理液后再离心的办法.核酸一般在下面,蛋白质一般在上清中.不过界限不是很分明,取样时要小心一些.
2.其实很多去掉核酸的方法不是引入新的杂质,就是破坏了样品中蛋白质种类和数量的完整性.最好的办法就是在制备样品的同时,尽量避免核酸的污染.如:做全菌体或者裂解菌体时,操作条件要温和一些,避免反复冻溶等.
3.不知道你的样品来源,其实蛋白质与核酸的性质还是有很大区别的,可以查查生化书或者蛋白质提取的方法,一定会有启发.
祝实验顺利!
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