蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于一抗的用量以及孵育的方式

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】关于一抗的用量以及孵育的方式

6327555[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108888
精华 1
积分 303
帖子 242
信誉分 102
可用分 2042
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1
 

【求助】关于一抗的用量以及孵育的方式


大家好
做wb,
首先我用的抗体u说明书 的推荐是1:1000(chemicon),请问大家我用1:2000可以吗? 因为一共也就30微升,感觉用几次就没有了。
第二:大家一抗孵育一般是多大的体积? 3毫升还是5毫升? 5毫升很心疼啊
第三:具体是如何孵育的? 看大家都说用袋 我还没有见过呢 !
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
2
 

1.商家推荐的稀释度一般是很保守的,1:2000应该没问题.
2.有专门的袋子,很便宜,不到10元吧,有几百个.
3.一张8.3*5.6 cm大的膜用2-3ml足够了,当然你如果裁减的话可以用更少.孵育其间最好20分钟摆弄下袋子,以防膜与抗体接触不均.
顶部
hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
3
 
还是按照说明书用比较好,可以用其他办法节省抗体:
1.抗体稀释液的体积可小些,将转的膜装入封口膜,用封膜机将封口膜边缘压的尽量小,不要压着转的膜就行,加入的体积够覆盖膜就行,一般1~2ml就够了。
2.一抗用过一次后,加0.1% 叠氮钠-20℃保存,可循环用4~5次,每次用时可再新加一点一抗。
顶部
2541[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75124
精华 0
积分 742
帖子 1144
信誉分 100
可用分 6580
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
4
 
还是按照说明书用比较好,可以用其他办法节省抗体:
1.抗体稀释液的体积可小些,将转的膜装入封口膜,用封膜机将封口膜边缘压的尽量小,不要压着转的膜就行,加入的体积够覆盖膜就行,一般1~2ml就够了。
2.一抗用过一次后,加0.1% 叠氮钠-20℃保存,可循环用4~5次,每次用时可再新加一点一抗。
......

=======================================================================

请问加0.1% 叠氮钠的作用是什么呢?有人说直接保存抗体在4度就行了?
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
5
 
请问加0.1% 叠氮钠的作用是什么呢?有人说直接保存抗体在4度就行了?

=================================================================

用过一次的一抗稀释液(加了脱脂奶粉或TBST)可加0.1% 叠氮钠保存延长其循环利用的次数。
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
6
 

抗体最好按照说明书来稀释,我们用反贴法孵育一抗,1.5*4cm的膜用约200微升抗体就可以了
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7
 
可以详细的谈谈反贴法吗?
我尝试过一次,总是溢出来啊
顶部