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标题:【求助】western blot的PVDF膜用0.2um的还是0.4um的？

uuooii[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western blot的PVDF膜用0.2um的还是0.4um的？


各位大侠，我要做western blot，但公司说PVDF膜有两种，一种是0.2um的，一种是0.4um的，我要检测的蛋白一个分子量是185kD，一个是70kD，请问，我应该选哪种PVDF膜？应该根据什么来选呢？多谢帮助！
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qhyu[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PVDF市场上出售的一般有俩种：0.45μm孔径和0.2μm孔径，作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性，一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于10kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合10-20kD范围。
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发表于 2014-5-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qhyu 于 2014-5-10 17:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

PVDF市场上出售的一般有俩种：0.45μm孔径和0.2μm孔径，作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性，一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于10kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合10-20kD范围。 ...

0.45μm孔径和0.2μm孔径，一般来说0.45μm孔径适合于>20kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。
0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大，从而会导致背景很高！
解决办法：用封闭液的时候加倍，时间加倍！不行就三倍！可以降低背景！
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c86v[使用道具]
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 小中大
PVDF膜是0.45μm孔径，PSQ膜是0.2μm孔径
我们公司一般用PVDF膜转印大于30kd的蛋白，PSQ膜用于小于30kd的蛋白
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发表于 2014-5-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问hlhua0525封闭多久？
孵育一抗和二抗的牛奶是什么浓度？
谢谢
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 小中大
PVDF市场上出售的一般有俩种：0.45μm孔径和0.2μm孔径，作用原理是疏水作用导致其强的蛋白质吸附性，一般来说均一的0.45μm孔径特别适合于10kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合10-20kD范围。
0.45μm孔径和0.2μm孔径，一般来说0.45μm孔径适合于>20kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。
0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大，从而会导致背景很高！
解决办法：用封闭液的时候加倍，时间加倍！不行就三倍！可以降低背景！
谢谢指正，我也是初学，根据公司得说明做得！我想问一下膜得孔径和蛋白子得KD成正比吗？不理解，是不是大分子量得蛋白需要大孔径！请楼上得从PVDF膜吸附原理来解释一下，大家也可以
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yysr238[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还是用0.2um的吧，这个孔径小，蛋白不容易转过，孔径太大可是经常会转过的。因为每次你做的三明治结构不太一样，电流的大小也不会一样，弄不好蛋白就会转过。
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 小中大
封闭:
1、原先我们用脱脂奶粉封闭的浓度是0.5%,为了减低背景,需要把封闭液的浓度加倍到1%,如果效果还是不好可以加倍到1.5%.
2、时间也要加倍，比如说，原先一小时，现在用两个小时。
为什么用0.2um的膜背景会很高,是因为蛋白的结合和膜的表面积有关,0.2um 的膜显然要比0.45 um的膜的内表面积大.所以我们在封闭的时候要加大封闭的量和时间,要尽量完全封闭.
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cbou876[使用道具]
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 小中大
PVDF膜是0.45μm孔径，PSQ膜是0.2μm孔径
我们公司一般用PVDF膜转印大于30kd的蛋白，PSQ膜用于小于30kd的蛋白

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你们什么公司?我想确认一下到底是多少?
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 小中大

Millipore公司的PVDF膜建议:分子量小于20KDa时用0.2um的PVDF膜
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