【求助】双向后银染如何避免大胶碎裂？

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标题:【求助】双向后银染如何避免大胶碎裂？

奇蒙kate[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位站友，小弟刚开始学习跑双向，24cm ,胶浓度12.5%,跑完在银染过程中大胶四分五裂，简直没法扫描，各位有何经验指导？

orangecake[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 奇蒙kate 的帖子

不知道你怎么使用fixing buffer.
我做的时候是overnight, 30分钟，要比30分钟，overnight后的胶结实一些。
希望对你能有用。

奇蒙kate[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 orangecake 的帖子

谢谢！可我灌胶时没有用到”fixing buffer“啊。。。。。

33号[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先确定你的过硫酸氨是新鲜的。质量不好的过硫酸铵制出胶易碎，韧性不好。
其次，跑完后，染胶的各步都要轻柔，特别是将胶从玻璃板上卸下，转移至染色盘中这步。刚开始做，没手感，很容易碎胶。
我一般先用去离子水将胶从玻璃板上冲起，再借助水的润滑作用，使胶滑入染色盘中。
祝实验顺利。

奇蒙kate[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

噢，我的APS 确实用别人分装冻存的，估计不是很新鲜，
谢谢33号老兄提醒！！！

orangecake[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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脱水
Fixing buffer就是二向电泳后，银染最开始的固定液。
这个液体的作用是清洗SDS，还有让胶脱水，以便为下一个buffer作准备。
如果一次是30分钟，二次过夜的话，容易让凝胶脱水严重，比较脆。所以调转过来比较好！！！
大胶本来操作起来就容易碎，虽然12。5%的比较结实。多做几次就好了！！呵呵~~

奇蒙kate[使用道具]
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发表于 2014-5-10 17:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #6 orangecake 的帖子

噢，，我用的固定液是自己配的，
75ml乙酸，300ml乙醇，375ml双蒸水。。。