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标题:【求助】分离纯化后的蛋白脱盐方式

dog002[使用道具]
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发表于 2014-5-12 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分离纯化后的蛋白脱盐方式


请教一下大家，分离后的蛋白如何脱盐啊，我现在只知道sephedex G-25或G-50和透析还有超滤。但是超滤需要的量大啊，我分离出来的蛋白峰最多也就20ml左右；还有就是透析，我感觉效果不好，并且时间长，蛋白易变性；然而再过柱子呢又是挺麻烦。请问一下各位战友还有什么其他更好的办法吗？ 谢谢大家了。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-5-12 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有脱盐柱，既然你不愿走柱子就算了。
还有浓缩交换buffer。就是浓缩到0.5-1ml，然后加入10mL没有盐的buffer，反复几次即可
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-5-12 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过蛋白质纯化的脱盐，主要用梯度法，步骤有点复杂
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小野花[使用道具]
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发表于 2014-5-12 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实用个脱盐柱很简单的,只要有设备,操作简单,效果好.
工业化也可行,回收率也高.
最后的浓度也不会降低很多
希望楼主不要怕麻烦
做试验就是这样的!!!
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的帮助，很是感激啊！但是我还想知道一下，你们说的脱盐柱指的是什么啊？是sephedex G-25或G-50柱吗？还是还有其他更好的呢。我们实验室的蛋白纯化仪是AKTA的。
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
脱盐之后，蛋白还是溶解在缓冲液中，还是有离子存在会不会影响进一步跑电泳什么的 ？
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我感觉跑电泳是会影响的，我跑电泳都是透析冻干后在跑的，但是我这透析的效果一般，但要比直接来跑电泳要好。我的脱盐应该怎么做呢，大家快来帮帮我吧 ，我最关键的问题就剩脱盐了，脱盐后我才可以往后继续做了。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

脱盐柱就是PD-10或者NAP-5柱，填料应该就是Sephadex G25，不过厂家已经装好了，而且有一定的操作规程
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超滤有处理几ML的超滤管。使用很方便的呀。MILLIPORE就有。叫AMICON-15你可以看一下。在cuturl('www.millipore.com')
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glass[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下大家，分离后的蛋白如何脱盐啊，我现在只知道sephedex G-25或G-50和透析还有超滤。但是超滤需要的量大啊，我分离出来的蛋白峰最多也就20ml左右；还有就是透析，我感觉效果不好，并且时间长，蛋白易变性；然而再过柱子呢又是挺麻烦。请问一下各位战友还有什么其他更好的办法吗？ 谢谢大家了。

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我个人认为还是跑柱子比较好,也比较温和,对蛋白的破环也很小,但是要明确的是你的蛋白的分子量或者颗粒大小与盐溶液的比较
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