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标题:【求助】请问1mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值是多少

wsll[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问1mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值是多少


请问1mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值是多少？
以前做过，一下想不起来了，谢谢
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值约290mAu，10mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值约2.08Au，1mg BSA的吸收峰面积约320mAu*ml。
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发表于 2014-5-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 moonlight45 于 2014-5-12 16:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值约290mAu，10mg/ml的BSA在akta上的UV280吸收值约2.08Au，1mg BSA的吸收峰面积约320mAu*ml。

受益了
还有个因素要考虑：您用的lamp 的pathlength是多少。2mm和5mm的结果显然是不一样的。后者理论上就是前者的2.5 倍。
1 mg/mL 的BSA在pathlength为1 cm时约为660 mAu；所以xsvulture战友用的是5 mm的lamp？
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eve_49[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
高，我也学习了！
不过注意了，AKTA的流动池至少有四个型号，全波长，100ml/min系列的是2mm，10系列是10mm，280/254单波长，100系列是2mm，10系列是5mm。四个流动池的吸收应该都不一样的。
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发表于 2014-5-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
惭愧惭愧！：（
原来FPLC还有那么多可选配制，我本来以为pH检测器是可选项，不知道吸收池也有的选择。不过吸收池的pathlength长短有什么意义呢？还是根据仪器其他的设备来配合呢？还有我以为FPLC就是20ml/min，而explorer才是100ml/min。
GEHealthcare战友应该是GE的高人了，应该开个讨论，让大家学习学习！
我公司的FPLC是20ml/min，280单波长，有电导检测，没有pH检测，不知道怎样看我们这台仪器的配制？
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49888[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
过吸收池的pathlength长短有什么意义呢？

======================================================================

Absorbance=extinction coefficient (M-1 cm-1)*pathlength (cm) * concentration (mg/ml)
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eve_49[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

流动池越长，灵敏度越高，所以，越是流速小的仪器，灵敏度要求越高，流动池就越长。
看配置，可以看说明书，或，流动池上有规格标记的。
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发表于 2014-5-12 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，谢谢各位了，我想了一下，吸收值应该是按照比尔定律来计算的
A=eBc，A，吸收值；e，吸光系数；B，光路长度；C，蛋白浓度
BSA的吸光系数一般是0.14，所以A＝0.14X2X1.0＝0.28mAu＝280mAu，所以我估计xsvulture的Akta系统是2mm光路的检测池
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
流动池越长，灵敏度越高，所以，越是流速小的仪器，灵敏度要求越高，流动池就越长。
看配置，可以看说明书，或，流动池上有规格标记的。

============================================

学习了。
刚才看了说明书，flow cell是5mm。看来westwin老兄的公式还要再修正一下。
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wsll[使用道具]
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发表于 2014-5-12 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 moonlight45 于 2014-5-12 16:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
流动池越长，灵敏度越高，所以，越是流速小的仪器，灵敏度要求越高，流动池就越长。
看配置，可以看说明书，或，流动池上有规格标记的。

============================================

学习了。
刚才看了说明书，flow cell是5mm。看 ...

嗯，看来不仅仅是流动池的影响，但经过你的提醒，我印象里曾用explorer100走过标准BSA 1mg/ml的样品，好像确实是这个数值，280mAu左右，但按照5mm来算明显不对啊，不知道哪个大哥能解释一下。
这个吸收值也不是很简单的问题啊
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