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标题:【求助】分离胶中有不规则的线

lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分离胶中有不规则的线


PAGE电泳32%分离胶(15mL 4.8gAcr 0.36gBis)，含30%尿素，0.1MTris-HCl(pH 8.2)，65uL 10%AP，7uL TEMED，凝固后胶里总有不规则线条出现，请问什么原因？
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不用尿素还是会出现，是不是AP加得太多了？
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没人做过30％的胶吗？胶聚合以后，胶与玻璃板之间有气泡，应该如何处理呢？
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发表于 2014-5-12 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

聚合后有气泡，如果气泡比较小且不在泳道上，靠近底部，那不影响电泳，否则，就会影响电泳行为。应该重新作胶。
ap的量一定不能过大，丙烯酰胺的聚合要一个一个来，催化剂过量那就聚合不好了
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发表于 2014-5-12 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的观点：
1.凝固后胶里总有不规则线条出现，可能是 你没有混匀的原因。
2.胶聚合以后，胶与玻璃板之间有气泡，因为你的 胶浓度太大，凝结的 太快了，你 可以把 配好的胶放在冰里，可以控制凝固速度。你可以试一下！
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
已经成功配制了30％的分离胶，不过今天电泳发现条带从左到右是一条斜线，我在两边加的溴酚蓝，左边的明显要跑得快，请问是什么原因？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是你灌胶的时候没有灌好，胶面部平导致的，你可以小心一点，轻一些，灌完以后摇一摇，再由就是要液封及时。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-12 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，想问一下大家AP和TEMED的量是如何确定的呢？是不是只要能使胶凝固，用得越少越好。最近经常把分离胶放在冰浴里过夜凝固，但是发现聚合后，分离胶上部不是平的，出现锯齿状，胶的浓度越大越严重，打开玻璃板，胶会向上凸起，是不是胶里面气泡太多了？
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