蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请教大家有关WESTERN BLOT和FCM 的区别？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】请教大家有关WESTERN BLOT和FCM 的区别？

ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
1

发表于 2014-5-15 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教大家有关WESTERN BLOT和FCM 的区别？


相关疾病：
鼻咽癌
大家好！我即将开始实验，以前无任何养细胞经验，请高手指点！以便实验顺利进行！先谢谢了！
问题如下：
我的实验主要是检测鼻咽癌细胞的一个膜蛋白分子的表达。
检测表达除作RT-PCR检测MRNA外，还需要作WESTERN BLOT吗？能否换为作流式啊？因为这个分子是膜蛋白啊？不知对不 ？这种方法有和本质区别啊？
期待你的指导，万分感激！
顶部
hustwb[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76894
精华 0
积分 463
帖子 524
信誉分 101
可用分 3523
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
2

发表于 2014-5-15 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
WESTERN BLOT AND 流式应该都要做的,我建议你先做FCM摸几例,条件成熟了再做WESTERN BLOT ,实在不行就只做FCM ,容易出结果
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2014-5-15 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上指点，但是听说FCM 不够稳定，对吗？
本人乃小硕一名，实验经费极有限，实验时间有很急，但又想做好些，为难中，请再帮忙指点一下，就我的实验这两种方法的利弊具体是？
谢谢！
顶部
moonlight45[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79769
精华 0
积分 487
帖子 654
信誉分 100
可用分 4096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
4

发表于 2014-5-15 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还是选实验室有成熟技术平台的做吧。太重要了。否则，你摸方法就要很长时间。虽然时间有，没钱呀。
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
5

发表于 2014-5-15 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
技术平台两种方法都可以做 ！唉，我现在是门外汉，很迷茫，就是怕做不好，急？
顶部
雪花子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72953
精华 1
积分 259
帖子 194
信誉分 102
可用分 1776
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
6

发表于 2014-5-15 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上并没回答实质问题， FCM和WB在检测蛋白时有什么区别并没有列出来，我也想知道
顶部
kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
7

发表于 2014-5-15 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

WESTERN和FCM都可以检测膜蛋白。个人认为，如果只是做表达量的变化使用western 就可说明问题，提取膜蛋白有试剂盒可用，我们用过普利莱的，好像二、三百吧，能检测到膜受体的表达情况；如果是想做一种未被报道的maker，最好两种方法都使用。
嘿嘿，干脆买既能W又能F的抗体好了……
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2014-5-15 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kulee 于 2014-5-15 17:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

WESTERN和FCM都可以检测膜蛋白。个人认为，如果只是做表达量的变化使用western 就可说明问题，提取膜蛋白有试剂盒可用，我们用过普利莱的，好像二、三百吧，能检测到膜受体的表达情况；如果是想做一种未被报道的maker，最好两种方 ...

我的实验经费实在有限，时间至多只有半年，要测得的确是一种报道较少的，我准备做一下面的内容：1、养肿瘤细胞测mRNA和蛋白的表达（拟用WESTERN BLOT）；2、收集标本，做免疫组织化学。
请教，以上实验是能否充分检测该基因在此种肿瘤中表达的情况啊？
如何改进更好呢？
期待你的指点！
顶部
kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
9

发表于 2014-5-15 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 ALALA 的帖子

不好意思，我不过是新手，指点可说不上~~如果只说明表达与否的话这三种方法应该够了。我这里有些文献是关于鉴定Marker的，如果需要可以发给你。不过都是有钱人做的。
Identification of Bronchioalveolar Stem Cells in Normal Lung and Lung Cancer 05年cell上的，等等。
顶部