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标题:【求助】常压层析柱如何串连

superboy[使用道具]
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发表于 2014-5-15 17:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】常压层析柱如何串连

想用两根常压层析柱串连进行分子筛层析，但不知能否串连，如何串连。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以，两跟柱子都同样高度直立，第一根的下口连第二根柱的入口（上面的）即可，其他都一样．
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢你的回答，不过还是不太清楚。
两根管子接口用什么连接？
我是分别装上两根1×100cm的层析管，一根的出口管伸入第二根柱子的进口处，两根流速不能同步，第二根的液面上升，使第一根的柱面上升，如何控制第二根柱子的液面，使其不要改变；液面也不能太多，否则太稀释样品了啊。
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发表于 2014-5-15 18:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知你用的是哪个公司的柱子，如果要把两根柱子接起来需要有个接头，不是向你这样用管子连接。你可以先询问你购买柱子的公司，看他们是否有街头，GE的肯定有，我以前用过。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的柱子需要用转换头,这样保证填料上没死体积,此外流速要用泵控制,没泵很难控制流速,串联只要把一根柱子的出口管和第二根柱入口管用软管连到一起没气泡就可以,你想靠自然流速的办法串联很难操作.除非你有两米高的架子,一根在上,一根在下串联到一起.但是这样下面柱子压力很大,sephadexG50以上都很难避免静水压到只流不动.其实你选择高分辨率的填料即可,何必这么复杂呢.
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！
我用的是分子筛BIO-GEL P6,排阻限在6000，我要分离的分子量范围非常窄，2000到8000，样品中不同组分分子量差别小，约600左右，也不希望能完全分开，只要有点分离效果就好，一根柱子几乎只是出一个峰。
所查文献说用这个效果是最好的了，他们的分离图谱也是只有峰尖分开，而且是用2.5×100的柱子，我没有那么多填料，只能用1×100的柱子，希望加长柱子能够增加分离效果。我用的常压玻璃柱是上海一家国产厂生产的，名字忘了。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实你可以不加长柱子,只要把上样体积减少就可以,流速慢点可以差不多到一样的效果,如你减少现在上样的一半那差不多相当于延长一倍的柱子,所以不一定非要串联.所以分不来就减少上样的体积.
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superboy[使用道具]
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发表于 2014-5-15 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的上样量比起文献来已经很少了，文献上200mg,我只上20mg,上样量太少又不好检测，紫外都在0.1以下。
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kewanqi2011[使用道具]
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 小中大
这么小分子的物质其实用HPLC是不错的纯化方法,而用凝胶柱难,有的时候文献未必能重复,串联也不一定能解决,你试试好了,如果样品带电荷,也可以选择离子交换,凝胶柱子通常分离分子量范围近的效果都不理想.何况你的填料老,如果有条件选择高分辨率的填料也许能好点,看看周围有没有预装柱子也许能解决你的问题,常规的填料和柱子真的是挺难的,不大看好.
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发表于 2014-5-15 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，国产柱，如果是那种柱头有一段溶液的玻璃柱，不可以串联，就像你担心的，第一根柱即使分开了，串到到第二根柱，又会在柱头混合，稀释......
2，GE的柱或国产仿GE的柱可以串，下口串上口，下口串下口都可以，因为GE的柱是可以反走的。
还有一个关键的因素，柱效，选用的柱子，装柱的方法，都可能影响柱效。串联两根柱，也就是增加一倍柱效，而好的柱子或专业的装柱技术，可能可以数倍的提高柱效。
不信，测测你的柱效（踏板数），看有多少。GE的柱和胶，90um的胶，3000/米以上，是及格水平，30um的胶8000/米以上是及格水平。
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