小中大【求助】提取的总蛋白浓度总是很低
各位大侠：
小弟欲做结肠组织中的NOS(一氧化氮合酶)，用的碧云天的裂解液（中型）（严格按照其说明书操作），每个组织标本加1ML裂解液时，用玻璃匀浆器冰上匀浆约5min，然后离心12000转/分，取上清夜，总蛋白浓度约为1微克/微升，上样量为30微克时，actin条带很清楚，但NOS一片空白，（一抗购自cell signal，最新购买），怀疑是上样量较少，于是第二次做了一个上样梯度，分别上样30，40，50，60微克，可还是只有actin没有NOS,仍然怀疑上样量不够，可是由于总蛋白浓度较低，上样量为60微克时大概需要50微升左右，小弟于是重新取标本，重新匀浆，这次每个标本加裂解液300微升（其余步骤同前），但是总蛋白浓度仍然约为1微克/微升？真是郁闷啊，这是什么原因啊？为何加1毫升和加300微升的裂解液得到的总蛋白浓度却是这么相近呢？有没有什么好办法可以提高总蛋白浓度？听同学说他们的浓度大概在20微克/微升呢
