蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】有了高度纯化的蛋白 怎么开展下一步工作？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】有了高度纯化的蛋白 怎么开展下一步工作？

xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
1

发表于 2014-5-15 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】有了高度纯化的蛋白 怎么开展下一步工作？

我今年读研２，目前已经得到了一个高度纯化的分泌蛋白（软件分析蛋白丰度９９％以上）
现在想从两个方面做下去
１　蛋白与蛋白相互作用　
　　想用pulldown方法做相互作用
　　１　听说可以用琼脂糖磁珠跟蛋白偶联　然后掉蛋白　　
　　２　能不能买蛋白Ａ的柱子　然后跟我制备的蛋白多抗结合，在和我纯话的目的蛋白结合在　去掉其他蛋白
　　
２　功能研究
　　不知道能做些什么东西
我只想读硕士　今年已经研２了
　　只有１年时间了　请大家帮我参谋一下哈
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
2

发表于 2014-5-15 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

研二就拿到纯化的蛋白，很有前景呀，恭喜！
可分另方面考虑：
1。基础研究：也就是你所说的几点可以考虑
(1)做蛋白-蛋白相互作用，做功能，但是首先要考虑你这个蛋白是什么类型的蛋白。比如是个酶，那么可以做酶和底物的相互作用；如果是受体，可作与配基的相互作用；如果是转录因子，可考虑EMSA，做与启动子的相互作用。要先查阅相关文献，看看做过什么
(2)作结构，拿到纯品蛋白，做结晶，看看三维结构等等，作进一步的构效关系
2。开发研究：也就是向应用方面考虑
(1)作抗体，本人没什么经验，提出来供参考
(2)做药物筛选模型，如果你的蛋白是个可能的药物靶点，可以利用该蛋白构建针对该靶点的药物筛选模型，做药。。。
个人意见，仅供参考！
祝好运！
顶部
xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
3

发表于 2014-5-15 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充楼上说的:
1.基础研究：知道相互作用蛋白加点功能研究发JBC以上没问题
2.开发研究:能带来商业价值,但发不了好文章.
楼主看重的是什么,自己选择吧,呵呵~其实这个问题也困扰我很久了,科学家的悲哀,哎~
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
4

发表于 2014-5-15 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
仅从我的专业为出发点的话，建议
1 与结构生物学实验室合作，你们做功能分析，他们阐明结构解释现象。前提：这个蛋白质的结构无人做过。
2 作突变体，选择重要氨基酸突变，分析一级结构变化带来的功能变化。
顶部
vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
5

发表于 2014-5-15 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好!!!
我能请问下你怎么拿到高度纯化的蛋白的吗?
说来惭愧,我也研2了,但是一直拿不到高纯度的蛋白
顶部
小游abc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108891
精华 0
积分 256
帖子 231
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
6

发表于 2014-5-15 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得楼主信息说的不太全。
首先这个蛋白是不是功能已知，序列是不是已经提交？如果功能未知，序列也未知，那么首先就可以做一下blast，初步分析蛋白的功能、家族，就是很好的一篇paper。
其次就是楼上所说的：如果这个蛋白没有同源结构，（identity小于30％）可以考虑解析结构。
做功能就更多了，可以考虑酵母双杂交，找到相互作用的蛋白。
可以做细胞试验，看看定位等等。
所以最重要的是这个蛋白目前已经研究到哪一步了。
Ps，说句不好听的呵呵，我每周都会拿到纯度99％的蛋白呵呵。
顶部
xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
7

发表于 2014-5-15 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真心感谢各位同胞的意见和建议!!
这个蛋白是某G+细菌的一个重要的毒素蛋白,有序列报道 只是目前国内外对此蛋白功能研究几乎为0 老板的要求是要我想做 pulldown 来掉掉受体 可是我又没很大把握 (老板是想不话多的钱)
我又不想在读下去了 只想在熬一年 嘿嘿(没追求把) 所以想问问大家
怎样不费很多时间初略的 做f功能研究(比如研究这个蛋白是不是糖蛋白 或则又没有凝血活性e.g)　　我们实验室条件有限．　
　　　大家见笑了！
顶部
fox_79[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76205
精华 0
积分 546
帖子 691
信誉分 100
可用分 4423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
8

发表于 2014-5-15 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

真是羡慕啊!我也是研2了,做纯化3个月了,我的目的蛋白需要3步纯化后纯度才能达到做氨基酸分析和测序等,但现在我的第二步纯化重复性很不稳定,一直郁闷呢. 我们这面的做功能性就是在细胞和动物方面着手进行的.
顶部
小游abc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108891
精华 0
积分 256
帖子 231
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
9

发表于 2014-5-15 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如楼上所说，楼住可以考虑解析其结构，仅仅是结构，应该就可以发表一篇很好的文章了。
可参见梁老师的许多毒素JBC文章。
顶部