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标题:【求助】2－D图，请大家指点！

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发表于 2014-5-16 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】2－D图，请大家指点！


这是我的2－D图，为组织样品，第一张图上样300ug，胶条24cm，点好像分得还可以，但是，与同类样品比，点的数目实在太少。而且点都集中在上面部分，下面很少，不知道可能会是什么原因？二向时间较长，每次需10小时左右，会是电泳速度太慢的原因吗？
下面一张图我用Clean－up处理过后，上样450ug，结果点多了一些，但是出现了很多条纹。所以现在很矛盾，不知道大家有没有建议？
我的样本没有经过超声这一步（因为实验室仪器坏了），横文多会是这与这个有关吗？


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发表于 2014-5-16 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是下一张图


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ii077345[使用道具]
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发表于 2014-5-16 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是做组织样品2-DE的，跟你的情况差不多，也是胶的下面部分的点很少，不知道为什么！胶的背景深可能和你没超声有关系，样品中的核酸会增加胶的背景，超声能减少很多。
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雪原[使用道具]
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发表于 2014-5-16 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
顺便再问大家一下，各位做二维电泳用的水是什么？我们用的是Millipore，但最近好像阻抗只能到10左右，有时只有5左右，这样会有影响吗？
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2014-5-16 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主的胶点主要集中在上部，可以考虑适当降低SDS-PAGE胶的浓度，以便点分的更开。（我也是这样的情况，从12％降到11％效果好多了）
Millipore水的电阻值一旦达不到18.2，就表示该换柱子了。不要将就着用。
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发表于 2014-5-16 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上说的很对。你这两块胶我感觉蛋白量明显不一样，不知是不是你染色的深浅不一致造成的，还是你上样量有误差造成的。
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发表于 2014-5-16 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是鸡肝脏的2D，结果跟楼主差不多，下面的电也是很少。我也证郁闷着呢？


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发表于 2014-5-16 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前的胶的图像也和你们的胶比较相似，我用的组织样品是心肌组织，开始用的是11.5％的胶，后面改用10％的胶后，图像有了很大的改善，点分的很开，而且在胶上分布的比较均匀。
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发表于 2014-5-16 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，我原先用的是12.5％的胶，下次准备用11.5％的试试。可惜实验室的Millipore彻底坏了，已经很久没有跑2－D了呀，郁闷中……
希望过年回来能开始实验了！
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发表于 2014-5-16 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降低胶的浓度就意味着凝胶的孔径会变大，分辨率会下降，2D的目的是为了把蛋白点尽量地分开，而使用低浓度的胶的分辨率相对较低，是不是会造成许多分子量相近的点的重合呢？遇到这个问题的时候我也想过降低胶浓度，但是由于这方面的考虑就没有尝试，希望LZ在试验后也能把低浓度胶的2D图发上来，如果结果明显的话大家也可以借鉴一下谢谢LZ分享。
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