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标题:【求助】苯酚硫酸多糖标准曲线的问题

toy[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】苯酚硫酸多糖标准曲线的问题


请各位多指教
苯酚硫酸法做葡萄糖标准曲线，相对指数能达到0.999以上吗？试了很多次，最高的达0.9983
另外，同一浓度的5根对照品试管所测值RSD高达11%，远远超出了5%
不知是什么原因？操作的问题还是试验条件的问题？
请那位大师多多指教
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题是个老问题了。
首先回答你第一个问题：根据我的试验数据结果，苯酚硫酸法做葡萄糖标准曲线，只要操作得当，相关系数（药典上不叫“相对指数”）是完全可以达到0.999以上的。不过，苯酚硫酸法本身误差就比较大，重现性不如蒽酮硫酸法。
第二个问题涉及的因素就比较复杂了，总体来说，有三种可能原因：
1、操作误差。不用我多说吧，自己按照参考文献仔细点就可以避免了。
2、仪器误差。比如分光光度计没有校正（从你的“同一浓度的5根对照品试管所测值RSD高达11%”推测）。
3、试剂误差。比如硫酸的质量对苯酚硫酸法影响很大，在我用过的硫酸中，昆山花桥化工厂和上海硫酸厂的硫酸比较好。还有苯酚是否经过重蒸处理。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关系数必须达到0.999这条标准曲线才能用吗？
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用同一瓶硫酸，同一次配的苯酚，重现性还是蛮高的。
我觉得主要在操作上，特别是在加硫酸时！硫酸比较粘稠，很可能加不平行。建议垂直加到试管里，到最后不连续滴时，统一滴4，5滴。而后马上在漩涡混合仪上振荡混匀。
另外一个就是对照加的不准，建议用比较准的枪加。那样既快，而且比较准。
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是要先静置10min才可以混匀吗？
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toy[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再次请教各位
请看看我的标线制备操作细节有何不当之处（每一浓度5根管）：
一定量葡萄糖样液加水至2.0ml，5%苯酚1ml，震荡混匀，浓硫酸7.5ml顺管壁加入，震荡混匀（捏住管塞，上下震荡），室温放置15分钟，冷水浴30分钟
测定，比色皿换样时蒸馏水洗一次，样液洗三次。
另有疑问：加各试剂时，我是先将所有浓度的样液全部加完后，再逐一浓度的完成苯酚、硫酸的加入，同一浓度的5个平行样加完后，最后统一完成加入浓硫酸后的震荡摇匀工作。请帮助分析有什么误差
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68943512yao[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

use 96 flatbottom plate, 20ul sample or standard+50ul concentrated sulfur acid, put it on ice after 15 mins, add 10ul 5% phenol, read absorbance at 415nm after 15mins, make the standard curve and measure the sample concentration.
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daod[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的哥们
我也要做多糖的含量测定
不知道你的方法出处是哪里?
我搜索了一下参考文献
没找到啊
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-5-16 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

张惟杰主编,<<糖类复合物生化研究技术>>里就有，从事多糖研究不错的一本书。
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loli[使用道具]
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 小中大

硫酸－蒽酮法做多糖的标准曲线，怎么会每次都做不好，我重复了很多次，方法是张惟杰主编,<<糖类复合物生化研究技术>>里面的方法，相关系数做出来很低，这个是怎么回，有做过的兄弟姐妹能不能告诉一下具体细节啊。
先谢了！！任务很急啊，拖了很久了，领导老是催。
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