小中大除了上面所说的这两点, 对于实验结果的分析,UnBlot由于无需转膜,因此可以在化学发光显色并记录后再进行总蛋白的染色,无论丽春红S、考马斯亮蓝,氨基黑等等或者Pierce的GelCode Blue Stain Reagent都可以检测后染色,比较蛋白免疫反应的特异性,方便判断实验结果。而且想一想,这可是在原位检测哦,真正保持一致性。另外由于UnBlot是在胶上检测,那也就是说可以reprobing啰,如果你的样本珍贵,要检测几种蛋白(比如一个基因表达的变化可能会引起几种相关蛋白表达的变化),你就可以很方便的洗掉原来的抗体,换个抗体检测其他目标蛋白!是不是很节约时间和样本呢? 至少不用再跑电泳了啊。只检测一个蛋白也可以用reprobing优化反应条件,这为我们获得漂亮的结果可是大为有益的。
还有一个问题就是适用范围的问题,以前UnBlot只能用于Invitrogen的Novx,Cambrex(以前的FMC,Biowhittak,生物通前面的文章有介绍的),Bio-Rad的Criterion brand Bis-Tris, Tris-Glycine,Tricine和Tris Acetate gels,包括变性和非变性胶,但是不能用于Bio-RadiGel和Zaxis gel。国内毕竟还是自配胶居多,经过改良后的UnBlot也可以用于自制胶了,这个方法距离大家就不再遥远啦!不过,做胶时要用硅化玻璃和有特殊要求(配胶时不要用SDS)。而就种类来说,UnBlot也可以用于3-8%,4-12%,8-18%,4-20% 和 10-20%的梯度胶,以及8-16%的非梯度胶。至于在蛋白适用性上,UnBlot并没有什么限定性,目前已有报告成功应用的例子包括20KD到160KD的蛋白。如果硬要说有的话,那就是UnBlot通用试剂盒目前只有小鼠和兔源、生物素3种选择(还有GST-tag融合蛋白的),如果你一抗不在此列,那么也就没有办法,乖乖的转膜,慢慢的摸索条件吧。
现在UnBlot参考价钱是“贵妃级”的¥5000左右(打折幅度以各人能力为准,嘿嘿,7折也要3500呢),可用于1000cm2胶,说明书说可以用10次(10x8cm)Mini胶,不过我们知道一般Mini胶去掉积层胶后通常不过5cm高,其实用20次应该没问题的。由于包含了二抗和显色试剂,还居然有25张X光片和配套的显色工具盒,呵呵,确实价值不菲。不过可以节约膜、转膜设备以及奶粉钱,确实可以一试。还有生物素标记方法和GST-Tag的检测试剂盒。我很期待,也相信,很快会有更方便常规实验的Unblot系列推出吧。老实说,Pierce还是很值得期待的,毕竟在研究蛋白的领域里有很好的口碑,也有许多很有创意的产品——尽管我们不太熟悉它,相信以后越来越多的目光转向蛋白研究,会有越来越多人记住这个与Hyclone合并的公司的。哦对了,生物通近期的优秀论文评选,获奖论文的奖金就可以用于选购Pierce/Hyclone的产品,如果你有文章在《遗传》《遗传学报》《中国农业科学》《中国生物工程杂志》上发表,也许可以考虑试试这个东西?
另一个“神奇侠”是来自Invitrogen公司的InVision His-tag In-gel Stain,其实这是个染料,根本就不算Western,但关键是巧妙得很,利用荧光染料交联带有Ni2+的NTA,其中的Ni2+可以高度亲和His-tag,所以可以直接染色PAGE胶,而特异地将样品中带有His-Tag的条带显示出来,就和用His抗体做Western Blot一样,又省掉了转膜、封闭、抗体等等麻烦的步骤,只要紫外或者扫描仪,而且灵敏度很高,达到ng级别。实在是好玩的很呐。如果你的实验室有表达His tag融合蛋白,一定要搞一个,比买His抗体要好哦,Invitrogen的招牌,应该也没有人怀疑吧?如果我还告诉你这个试剂盒做一个检测只需要100多元钱(¥3498,20mini-gels),是不是想买了呢?如果是这样,那就赶快行动吧。
谢谢!