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标题:【求助】关于蛋白表达的疑问

pulala[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于蛋白表达的疑问


１，一个载体能同时表达两个独立蛋白吗？
２，一个载体能同时表达一个蛋白，和转录一段基因，但这段转录基因并不表达？
希望能得到指点。
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，有这样的载体存在。不过很多人还是用两个载体转染。
2，没听过这种情况。希望高手回答
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一个问题，我可以明确的回答：
一个载体是可以同时表达两个蛋白的，具体的质粒，我再回去查一下呵呵。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

查到了，请看这篇文献
Molecular Architecture and Functional Model of the Endocytic AP2 Complex
Cell, Vol. 109, 523–535, May 17, 2002,
是用两个质粒表达四个蛋白。
如果第一种情况存在，那么第二种你说得情况肯定也存在。
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00无名指00[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一种情况可以采用Novagen的pACYC-duet载体，或任何还有IRES的表达载体
第二种情况好像没有发现商业化的载体，不知道这有什么作用？研究蛋白和基因的相互作用？
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bling[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一中情况是可以做到的,也有这样的商业化载体.
第二中情况应该也可以做到，把第一中情况中的载体中的一个核糖体结合位点想办法去掉，当然前提是第一种情况中的载体有两个启动子。
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pulala[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上站友太心细了，还找到文献，我会细细研究，谢谢。我是想研究蛋白和基因的相互作用. 从以上战友的回答，同时翻译和转录不同的基因应该是可行的。但不知道两者的效率是否一样？还有被翻译的目的基因mRNA会不会干扰被转录的基因与表达的蛋白之间的作用？
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pulala[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提到　“第二中情况应该也可以做到，把第一中情况中的载体中的一个核糖体结合位点想办法去掉，当然前提是第一种情况中的载体有两个启动子。” 我不是太明白。按照我的意图，我应该在第一个目的蛋白基因后加上终止子，在第二个转录基因上去掉核糖体结合位点，但加上启动子。这样对吗？请指教。
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pulala[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一个问题，从手头上的资料来看，做表达，我可以做原核，真核，以及体外表达。　大家有什么建议或偏向？有什么基本资料可以推荐一下。万分感谢！！！
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-5-17 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果偏重产量的话，当然原核表达快并且常量高；注重活性的话，真核可能更好一些。
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