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标题:【求助】如何定量细胞里的某一个蛋白？

zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-5-19 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何定量细胞里的某一个蛋白？


如何定量细胞里的某一个蛋白？（用质谱的方法）
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发表于 2014-5-19 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是想绝对定量? 还是相对定量?质谱可以做到但不会那么准确.我现在正在使用这种方法,论文准备中.
如果是一种蛋白并且可以找到标准品,还是用western, ELISA比较好.
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-5-19 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

绝对定量了,没有标准品啊.请问质朴如何做.
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发表于 2014-5-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

质谱方法能定量么？如果你要确定这个蛋白的组成或分子量，倒是可以用质谱，定量？找到蛋白的特殊性质就可以做了
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发表于 2014-5-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

虽然有一些用质谱作绝对定量的研究报告，原理是在样品加入多肽标准品，然后根据多肽的摩尔推测待测样品多肽的摩尔数，由于存在即使在同一复合物，离子抑制程度不同（打个比方，一样的量的20多肽，经过质谱后得到的峰下面积是不同的）。所以用质谱作绝对定量技术不成熟。但可以做相对定量。
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发表于 2014-5-19 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有听的特别明白，如何选择多肽的序列呢，有没有标准呢，此外我看到文险中好多用同位素的，如果不用同 味素能否进行定量。用外标法或内标法哪个更好一些？
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发表于 2014-5-19 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我忘记那篇论文具体用什么多肽，选择应该是没有什么标准，ang II用的比较普遍，内标可以用trypsin自身水解多肽或一种表达不变蛋白多肽，像actin什么的。不用同位素也可以的。没有看到外标还是内标好的报告。 内标不需要占用MS2时间。外标可以精确控制加入的量。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-5-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

angII是什么东西？actin是什么啊?
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发表于 2014-5-19 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zhenxin 于 2014-5-19 16:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

angII是什么东西？actin是什么啊?

血管紧张素 II, 通常用来调试质谱的. Actin是细胞骨架蛋白,通常作为western blot的内参.
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