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标题:【求助】western 湿转恒流好还是恒压好？

vera+[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western 湿转恒流好还是恒压好？


western 湿转恒流好还是恒压好啊，我做western一直用的是恒压，转两个膜后考染胶总是一个有残余蛋白条带一个没有，是不是恒压不好啊，这两种方法哪个好啊？
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、湿转一般恒流恒压都可以，没有优劣，BIO-RAD 说明书上如恒流，转膜一般350mA 70min,恒压 100V 90min
2、应该不是恒压或恒流的关系，你这种情况很可能是你的滤膜、凝胶夹或你的膜气泡没有赶净等原因造成，注意检查下滤膜，如已经变薄，需要换张
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的蛋白分子量是43KD，需要什么转膜条件阿
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S6044[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果一直有个不行，那么可能有个电转装置或其配置东西出了问题，和两种方法无关。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白分子量是43KD恒流，转膜一般350mA 70min,恒压 100V 90min 足够
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vera+[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天转膜恒压80V 120min ，转膜后丽春红染色还行，可是转膜电流不到100 mA ，难道我的转膜电流太小么？是否有问题呢？我是同时转了两张膜，用的是PVDF膜
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白分子量是42KD和15KD,转膜用恒压80V,2h可否?

没有问题。其实转膜不一定非要很完全才能进行WB的后续步骤，立春红染过后看到有条带就可以，后面一样可以反应。
你湿转时是两个膜并排（可以说串联吧）放置在两个电极之间的么？那样势必不能两个转的完全一样，我做过，总是一个多一个少，好像是靠近阴极的那个转的快些。

[ 本帖最后由 wood533 于 2014-5-20 11:10 编辑 ]
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的蛋白２００ＫＤ左右，请问什么样的湿转条件比较好啊？多谢．
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发表于 2014-5-20 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是在一张膜上先转,然后在孵育时再把膜剪开,分别加一抗.
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S6044[使用道具]
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发表于 2014-5-20 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一般湿转都喜欢用恒压,一般是30-40V过夜转,60V 3-4h,100V 1h.
其中我最喜欢过夜转.
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