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标题:【求助】转化后的菌落怎么会是这样?

ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】转化后的菌落怎么会是这样?


上周五晚上做的转化,周日才长出来,而且菌落很少,大约20左右,问下这些菌落是否正常,还是杂菌? 谢谢.
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INK[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般的情况是10h后可以看到菌落，
14-16h就可以做下一步鉴定了。
你的应该至少是近30个小时才
出，十有八九是杂菌。建议你重新
确认平板抗生素的正确与否，重新
做连接转化。
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意npng，转化后的菌涂板后一般12-16h 可长出，最长不超过20h
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daod[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不同意楼上的意见。
如果是已经提取好的质粒，的确是会在16小时之内长出。
而用连接产物做转化，16小时很难看出菌落。我一般是第一天做了，第3天才能看到菌落。
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发表于 2014-5-20 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关键问题是你用的是大肠杆菌还是农杆菌?要是大肠杆菌是转化后的菌涂板后一般12-16h 可长出，最长不超过20h ;农杆菌就是要48小时左右才能长出来的
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发表于 2014-5-20 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上意见，希望楼主说明问题的背景：质粒抗性？什么感受态细胞？菌落大致形态等等，最好附张图片，呵呵。
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家了;
质粒是带有amp抗性的;
用cacl2法制作的感受态细胞,我觉得我的感受态细胞是没有问题的;
因为我实验时用另一种质粒同时涂板做转化,14小时左右就长出来了.
说明一下:我是把滴在滤纸上的重组质粒dna直接洗脱出来以后,用制备好的感受态细胞作的转化;
至于菌落大致形态: 2-3mm,颜色是乳白色的，但是他们是靠近平皿边缘丛集生长的；
我是刚进实验室的新手，以前我们实验室没有做过分生这块，觉得起步好难啊，还请各位大侠多多指教，谢谢：）
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，我的感受态细胞是DH5a菌株经cacl2法制作的，按说是１２－１６小时可以长出来的
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议：重做一次，并且设计一个阳性和一个阴性对照，大肠杆菌是转化后的一般12-16h 可出现单菌落，最长不超过20h；农杆菌约48小时。而且，菌落数目还和其它条件有关：如菌种类型、抗性、培养条件、感受态的制备，甚至每个人操作手法不同都会导致结果不同！但主要目的是要筛选出阳性克隆，菌落数量只是一个参量，并不绝对！
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c86v[使用道具]
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发表于 2014-5-20 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人感觉你是将别人给你的质粒用cacl2法转化到感受态细胞中。
转化过程中，最好做感受态细胞的空白对照，可以排除感受态细胞自身问题，其它实验一样，尽量都做对照，即使有问题也好找原因。
转化后菌落不在乎多，关键是要转化到细菌中，毕竟质粒来之不易。菌落的多少与质粒有很大关系。
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