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标题:【求助】分子筛装柱为什么老产生气泡?

8黑眼圈8[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分子筛装柱为什么老产生气泡?


各位高手:
我现在用sephacryl s-200分离蛋白,用的层析柱是16mm*80mm,现在碰到很头痛的问题是,每次装柱的时候没有什么气泡产生,可是平衡的时候气泡就一连串出来,特别是恒流泵里的硅胶管上有很多小气泡,不知道怎么回事,柱子都重装了还几回了,可是没有改进,很着急啊,望各位高手迷津,谢谢!
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bling[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

平衡柱子出现气泡可能有6个原因：
1、树脂从冰箱贮存状态放置室温。柱内外温度不均。
2、使用横流泵平衡时，平衡缓冲液的温度与柱内树脂的温度不同。
3、树脂填装前没有经过脱气处理。特别是多孔树脂，比如Sephadex G系列等。
4、横流泵的位置。横流泵位于柱头产生通过压力平衡不易出现气泡；横流泵位于柱末通过吸力平衡，如果柱子漏气或填料过实均易产生气泡。
5、柱子两头垫圈密封不好，导致柱子漏气。
6、横流泵的管路有老化导致漏气。
如果其他因素排除后依然在平衡时有气泡，极有可能是6th种可能。建议更换横流泵管路。
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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楼上说的很好
1.树脂，平衡缓冲液，柱子的温度要达到平衡。
2.装柱前要将层析柱底部死空间内的空气排空。
3.再装柱子的时候应避免在通风和日光直晒得环境中进行，防止温度改变造成层析柱内产生气泡。
4.介质不能太稠，太稠也会容易产生气泡，当然也不能太稀，那样的话要多次装入造成界面。一般介质：上清液3：1。
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68943512yao[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有可能是水的问题。我经常看到这样的情况发生：一杯新鲜制备的去离子水，在实验台上静置一段时间，或者搅拌溶解盐以后，容器壁上就挂满了小气泡，这可能是水中溶解的空气产生的，我想这可能也是柱子中间出现气泡的原因之一。
试想可以用抽真空脱气处理，或者加热后抽真空。
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发表于 2014-5-21 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位热心帮助,
我的胶和仪器都是新的,胶使用时候没有脱气,树脂和柱子还有缓冲液都是在室温下,装柱前有排气,还用水先过了下柱子半个小时,介质是按照介质：上清液3：1的比例来配的,恒流泵位于柱末,之前也是这样操作,都没有气泡,现在有.哎,我再按照各位高手们说的注意事项重新装看看.再次感谢!
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1,流动相要脱气
2,柱子的温度不要变化
3,有可能是一开始凝胶内部就还留有气体,可以用20%酒精重新悬浮这个凝胶(可以稍微加热赶气体),然后再用水相置换掉,
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chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

除了新胶需要脱气，泵是不建议放在柱出口处的。我估计你是用泵抽的方法在装柱，可以。但使用过程，最好将泵换到柱的进口。因为，如果你的静水压流速小于你的泵流速，倒抽是会抽出气泡的，和副压脱气原理一样。
另外楼上说的3：1比例，通常GE的填料是建议用1：1~1：3（自然沉降24小时后，上清：沉降胶体积），太稀，柱效不好，装柱时间太长。
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发表于 2014-5-21 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那请问新胶怎么除气呢?说明书上没有涉及到这方面,麻烦高手指点!
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发表于 2014-5-21 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1, 煮沸，如果胶耐高温
2，负压抽气，可以放在真空箱内，或将胶直接放在抽滤瓶内
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standbyme[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
sephacryl s-200应该是耐高温的胶吧
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