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标题:【求助】原核表达后,SDS-PAGE电泳问题?

boom[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】原核表达后,SDS-PAGE电泳问题?


各位高手好:
小弟处做原核表达,基因序列已知.用蛋白质序列在expasy上预测蛋白质的分子量为48kDa.但我原核表达诱导出的蛋白用低分子量Maker比对,为33kDa.
小弟想问一下各为高手,为什么会这样?(PCR,酶切结果都没有错误)
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不知道你使用的是哪种低分子量Marker。Marker显示的大小不具有线性关系，一般仅仅是目的蛋白在30kD和50kD之间就可以认为是没有问题的，即使条带比较靠近50kD。比较保险的鉴定方法是western，如果是阳性结果就没有问题。SDS-PAGE只是一个初步的鉴定。
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发表于 2014-5-21 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

赞同楼上的
软件预测的结果和实际大小也有些出入的。
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我使用的是大连宝生物的低分子量Maker,
但是，我看了一些文献都是和与预测的结果，差不到那去，可是我的却相差很多。还是有点不理解，希望在给予帮助！谢谢大家了！
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 cj_mondy 于 2014-5-21 16:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我使用的是大连宝生物的低分子量Maker,
但是，我看了一些文献都是和与预测的结果，差不到那去，可是我的却相差很多。还是有点不理解，希望在给予帮助！谢谢大家了！ ...

我用的分子量Maker跟你是同一个的,看来这个maker有问题了
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果想知道准确的蛋白分子量，最好做质谱分析。
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2014-5-21 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

克隆的序列测序看看吧，希望不是克隆序列里的某个密码子突变成了终止子；也游可能是密码子使用偏性
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