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标题:【求助】140kd蛋白的转膜方法求教

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发表于 2014-5-21 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】140kd蛋白的转膜方法求教


准备做动物脑内KCC2蛋白的表达，由于没做过140KD的蛋白，谁能告诉我具体的转膜技术
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-5-21 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的目的蛋白是155KD
我习惯使用湿转法，70V恒压，转3小时左右，一直效果挺好的
至于具体技术，每个实验室是有自己的适用条件，建议与自己实验室的同事多商量，再有 搜索本版，版内有过相关讨论的
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发表于 2014-5-21 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我转的是100KD的蛋白，60mA过夜转（湿转），效果出是一直比较确切，战友可以试一下
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发表于 2014-5-21 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议采用50V过过夜转。
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发表于 2014-5-21 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

过夜转膜需要放在4度吗？还是常温？
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-5-21 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然是4度了，再说140kda怎么转都转过去了，基本100v两个小时不会有问题，不要过夜。
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 小中大

众战友回答的都不错，如果能告诉我KCC2(钾氯共转运体蛋白)的western的protocol，就更好了。
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发表于 2014-5-21 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的170kd，湿转100v80min，半干转3ma/cm2，110min。
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发表于 2014-5-21 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做过130kd蛋白,电压为70v,时间90mins,冰浴湿转
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