小中大
再补充些：气泡上面是间隙胶，气泡下面是分离胶
一. 电泳的配方如下：1． Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C）
Acylamide 48.0g
Bis 1.5g
Water make up to 100ml
2. High Bis acrylamide (49.5% T, 6% C)
Acrylamide 46.5g
Bis 3.0g
Water make up to100ml
3. Gel Buffer (2M Tris/cl, PH8.45, 0.3% SDS)
SDS 0.1g
Tris 12.1g
Water make up to 50ml
PH to 8.45 with HCL
4. Anode (Lower) buffer 阳极缓冲液 (0.2M Tris/cl, PH8.9)
Tris 12.11g
Water make up to 500ml
PH to 8.9 with HCL
5. Cathode (Upper) buffer 阴极缓冲液 (0.1M Tris/cl, 0.1M Tricine, 0.1% SDS, PH 8.25)
Tris 6.06g
Tricine 8.96g
SDS 0.5g
Water make up to 500ml
二、 胶的配制
1. 16.5% T 6% C separating gel 3ml
49.5% T 6% C 1ml
Gel buffer 1ml
Glycerol 0.64ml
Water 0.36ml
10%AP 0.01ml
TEMED 0.001ml
2. 10% T 3% C spacer gel 1ml
49.5% T 3% C 0.21ml
Gel buffer 0.33ml
Water 0.46ml
10%AP 0.0033ml
TEMED 0.0003ml
3. 4% T 3% C stacking gel 1.25ml
49.5% T 3% C 0.1ml
Gel buffer 0.31ml
Water 0.84ml
10%AP 0.01ml
TEMED 0.001ml
三. 上样缓冲液用的还是跑普通sds-page的，5×的，因为之前把蛋白一次变性了，所以没有重新配，以前看园子里有人问过，记得说这样不会影响的。有一点得交待，蛋白抽完后测浓度是12umol/ul，上样10ul(2ul缓冲液）。
四. 电泳时30v 1h，进入分离胶后调为100v，溴芬兰离底线1.5cm处停止电泳，50％乙醇＋10％乙酸固定20分钟后考染40分钟，脱色40分钟。
带彩线的marker最底下一条分子量应为10kd，电泳过程中没有看到，现在胶上最后一条应该是15kd的，不带彩线的marker最底下一条为14点多，胶上能看到。以下就什么都没有了：（ 请学长们帮忙分析，感激涕零！！
