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很抱歉没能及时给你回复,线粒体的提取方法较简单、通用。不同组织在匀浆(或超声破碎)的处理过程是有些许差异的,但在进行梯度离心及以后的处理是相同的。依据我回心肌线粒体的方法提没问题。
将裂解液加入你提取的线粒体样品中,加入PMSF、cocktail和EDTA(我一直加的,效果不错),冰上放置一会(10min左右),超声破碎,功率别太强,依据你的超声破碎仪而定。然后室温放置一小时。再然后脱盐、浓缩,测浓度、等点聚焦......
你做的是大鼠(以500g/只计)是吧?半边的大脑皮层,提的线粒体蛋白能保证你做银染的量,若需要也可以尝试pool在一起做考染。不知你还有什么问题?