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标题:【求助】琼脂糖新手上路，灌胶漏，跑胶慢，胶还漂起来了

standup[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】琼脂糖新手上路，灌胶漏，跑胶慢，胶还漂起来了


琼脂糖新手上路，网上自学，望高手关照
1.我用的是北京六一厂产的，有个胶板，还有个托盘，我把胶板放塑料托盘里，谁知道灌胶漏，在胶板底部和托盘面上成一薄胶，不知道有啥影响没？
2.还有，我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
3.我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
请教各位，切盼
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的ＴＡＥ怎么配？胶是怎么配的？多大的浓度？放在槽子里必须把胶按下，与电泳槽横边平行，以免跑斜．你的电压是多大？
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发表于 2014-5-24 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二楼问的很详细了，不知道楼主注意了没有？如果胶板实在是漏胶没法用，可以不用托盘了，直接用胶布封住两端就行了，电泳的时候撕下胶布就行了。
我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
没有遇到过这样的问题啊，可以把胶拿出来直接放电泳槽里，也可以在胶板里跑，缓冲液刚没过胶一点就行了，不要加的太多，不过也不至于浮起来，你不会用的50x的原液吧。
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flower-201[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
胶块本来就是可以在胶板上滑动的，它不是粘在胶板上的。这没问题。
漂起来的情况就不明白是怎么回事了。没遇到过。
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XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有一个相似的电泳槽，制胶时胶版下的薄胶不会影响电泳，去掉就行，胶飘起来可能是电泳液太多，，电泳液只要没过胶就行
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发表于 2014-5-24 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 standup 的帖子

我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
我觉得这个问题可能是由于相对于你的样品来说胶浓度过高造成的，你配的胶是百分之多少的？样品的分子量又有多大？
建议你查查TaKaRa产品目录后面的附录，那上面有琼脂糖凝胶的浓度和欲分离样品大小的范围，很有参考价值~
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样本的分子量是多少呢？要根据样本分子量的大小选择胶的浓度的。TaKaRa产品目录上就有。另外，跑电泳的时候电压是多少？是不是太低呀？
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议好好看看生化的实验书，严格按照操作步骤来~~~~偶第一次跑胶的时候最多也就手抖了一下加样稍微溢出一点而已~~~
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有，那个不叫漏，你胶槽和托盘没洗干净~~胶槽没按死，灌胶的时候胶太热了，往边上渗透下去的，严格操作绝对不会有薄胶的~~
可怜的人哪~~这些看别人做过一次就全会了么~~老师实验课的时候也全部教过的啊~~~
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-5-24 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
至于楼主的问题,我个人认为应该先看看生化实验书按部就班!!
1.如果漏胶就要重新灌一次胶.造成漏胶的情况,有可能是两块玻璃片之间的塑料带太细了,应该换粗点的,也有可能梳子太粗了,造成边缘上有空隙!!
2.你的第二个问题,可能是你上面做胶影响了,也可能是你加的缓冲液太多了!如果是缓冲液的问题,那你加的缓冲液应该要刚好漫过加样孔!
3.电泳的时候,样品不是垂直的移动,可能你的样品到胶的边上去了
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