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标题:【求助】多糖纯化实验中问题

bs4665[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】多糖纯化实验中问题


最近我想对粗糖进行纯化，我已经进行了脱蛋白、脱色素和透析，花了我一个星期的时间，昨天晚上好不容易可以去醇析了，我用的是95%的乙醇，然后放到冰箱里，可是今天早上来的时候，却发现一点沉淀都没有，为什么啊？
请大家帮帮忙，指点指点，不然我这一个星期的工夫就白费了：（
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 是不是加入乙醇不够，溶液的乙醇浓度不够啊？一般要达到75％以上容易沉淀，有些糖要到90％以上的乙醇浓度中才能沉淀。因此建议加大乙醇用量。
2. 也有可能溶液中糖的含量本身就很小。建议在透析完之后，把溶液适当浓缩，再进行醇沉。
3.也许只是糖不多看不见而已，先离心下试试吧。
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bs4665[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的乙醇是95%的，应该浓度不是问题；
我用了6g25%的粗糖，糖的含量应该不会小吧？
离心之后，我发现还有少许活性碳，是不是多糖被吸附了，可是被吸附量应该不大吧？
恳请大家帮忙！
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

乙醇的终浓度是多少？6g粗多糖溶解到多少体积的水中的？如果以上都达到了要求，建议加盐试试，可以加入1%的醋酸钾或者氯化钠 。
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bs4665[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我将6g粗多糖溶到400ml水中。95%的乙醇与多糖溶液比为1：1。
还有问题想问问：透析过程是不是得在低温下进行？ 透析水是不是经常得进行更换？我一天晚上把装有多糖溶液的透析袋放到自来水中透析，可是到第二天中午去看的时候，透析袋内外都有白色的絮状悬浮物，这是什么东西啊？是不是有东西变质了啊？
粗多糖中的糖含量是很少的，醇析之后的沉淀可以很明显的观察到么？
我是新手，刚刚接触多糖，实验室又没得师兄师姐请教，正在郁闷中，还请大家多多指教，十分感谢！
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.透析过程肯定要得低温下进行的，不然的话溶液会变质的。透析水3~4h更换1次。不更换水，透析袋内外浓度平衡了再放多长时间都没有作用的。透析袋内外都有白色的絮状悬浮物，可能就是你的溶液变质了或是NaCl。
2.粗多糖中的糖含量是很少的话可以不要醇沉，浓缩一下直接冷冻干燥。
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

沉淀前你检测一下糖含量吧，你做了这么多步骤，肯定损失很大，透析袋截留分子量多少，你的糖多大分子量
你好多试验步骤都没设计好呢
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上说得很有道理，先测一个浓度看看，如果浓度太低就减压浓缩一下。没有什么好担心的，把乙醇与荣誉的比例调高到3：1试试看
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发表于 2014-5-24 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的乙醇加了多少?你要计算体积的,一般乙醇浓度从95%变成80%的时候沉淀效果是最好的!
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-5-24 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你加的乙醇量太少了，一般是乙醇：多糖溶液=3：1。你加1：1肯定得不到多糖的沉淀。
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